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百萤课堂:如何确定荧光分子的亮度?

作者:西安百萤生物科技有限公司 2024-03-20T00:00 (访问量:18897)

今天百萤为大家介绍一个非常实用的小技巧,用于确定荧光分子的亮度。如果你想选购一种荧光探针,而你已经确切的了解到了几种探针均可以满足你的实验要求,但是,哪一个才是荧光强度好的呢?求人不如求己,实验还得靠自己!今天小萤告诉你之后,请收藏好它!

荧光分子的亮度取决于两个因素:

1. 消光系数(ε):荧光分子吸收特定波长的光的强度。

2. 荧光量子产率(Φ):吸收光转换为发射光的效率。

有小伙伴要问了,知道了消光系数和荧光量子产率又该怎么办呢?请记住以下公式:

亮度=消光系数(ε) x 荧光量子产率(Φ)

实例验证:大家对于PE、APC、Cy5应该都是比较熟悉的。

· PE = 1,960,000 cm-1M-1 (ε)x 0.84(Φ) = 1646400

· APC = 700,000 cm-1M-1 (ε)x 0.68 (Φ)= 476000

· Cy5 = 250,000 cm-1M-1 (ε)x 0.20 (Φ)= 50000

现在相信大家不用我说,也能看出哪个更亮了吧!那有小伙伴又要问了,可是荧光探针那么多,我找不到确切的消光系数和荧光量子产量啊!别着急,下面是我们为您总结好的常用的产品消光系数和荧光量子产率请收好!

产品名称

消光系数(ε)cm-1M-1

荧光量子产率(Φ)

备注

iFluor 350

20000

0.95

在水性缓冲液中(pH=7.2)

iFluor 405

37000

0.91

iFluor 430

40000

0.78

iFluor 450

40000

0.82

iFluor 488

75000

0.9

iFluor 514

80000

0.83

iFluor 532

90000

0.68

iFluor 546

100000

0.67

iFluor 555

100000

0.64

iFluor 560

120000

0.57

iFluor 568

100000

0.57

iFluor 594

180000

0.53

iFluor 610

110000

0.85

iFluor 633

250000

0.29

iFluor 647

250000

0.25

iFluor 660

250000

0.26

iFluor 670

250000

0.63

iFluor 680

220000

0.23

iFluor 700

220000

0.23

iFluor 750

275000

0.12

iFluor 790

250000

0.13

iFluor 800

250000

0.11

iFluor 810

250000

0.05

iFluor 820

250000

N/D

iFluor 840

200000

0.02

在PBS中

 

产品名称

消光系数(ε)cm-1M-1

荧光量子产率(Φ)

备注

Alexa Fluor 488

73000

0.92

缓冲液(pH=7.2)

Alexa Fluor 532

81000

0.61

Alexa Fluor 546

112000

0.1

Alexa Fluor 568

88000

0.69

Alexa Fluor 594

92000

0.66

Alexa Fluor 647

270000

0.33

Alexa Fluor 660

132000

0.37

Alexa Fluor 680

183000

0.36

Alexa Fluor 700

205000

0.25

Alexa Fluor 750

290000

0.12

 

产品名称

消光系数(ε)cm-1M-1

荧光量子产率(Φ)

备注

Cy3

150000

0.04

 

Cy3B

120000

0.58

 

Cy3B酸

120000

0.58

 

Cy5

250000

0.27(PBS)/0.4(乙醇)

 

Fluo-4

82000

0.16

 

Fluo-8

23430

0.16

 

Cal-590

78000

0.62

 

7-AAD

27500

0.02

在双链DNA结合的情况下

AFC

17000

0.53

在乙醇中

Hoechst 33258

46000

0.034

 

SYTO 17

88000

0.964

 

SYTOX绿色

67000

0.53

在DNA中

JOJO-1

171000

 0.44

在DNA中

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