你知道怎样选购卡那霉素(Kanamycin)么?

今天实验室同事让小编采购一点卡那霉素,小编打开Sigma官网搜索“卡那霉素”,彻底迷茫了,那么多种类。
做分子克隆,卡那霉素到底买哪一种?
一句话明示:普通 KanR 质粒筛选,买 Kanamycin sulfate(Kanamycin A sulfate salt)即可。
做分子克隆时,很多人第一次采购卡那霉素都会被目录绕晕:Kanamycin sulfate、Kanamycin A、Kanamycin B、Kanamycin C、USP 标准品、HPLC 对照品……名字很多,看起来像一道复杂选择题。其实,如果你的用途只是用于含有卡那抗性质粒载体改造,带 KanR 的大肠杆菌质粒筛选,答案非常简单。
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采购结论:常规分子克隆选 Kanamycin sulfate / Kanamycin A sulfate salt,分子生物学级、BioReagent 级或细胞培养级均可。Merck/Sigma 体系里,K1377 可作为首选,K4000 也可用于常规筛选。很多国产的也能用。 |
A、B、C到底是什么意思?
卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素。供应商目录中出现的 Kanamycin A、B、C,更多是化学组成、发酵相关组分或分析检测语境下的细分名称。对分子克隆来说,我们关心的不是研究哪一个异构体,而是能否稳定筛选带有 KanR 抗性基因的菌株。
因此,实验室常规使用的“卡那霉素”通常就是 Kanamycin sulfate,产品同义名里常写作 Kanamycin A / Kanamycin sulfate salt。看到这个组合,就基本选对了。
哪些不要优先买?
• Kanamycin B / Kanamycin C:除非你要做成分分析、药典研究或特定抗生素机制研究,否则不建议作为克隆筛选常规采购对象。
• USP/EP 标准品、HPLC 对照品:这些更适合质量控制、含量测定或法规检测,价格和用途都不适合普通平板筛选。
• 临床注射剂或复杂制剂:辅料、浓度、灭菌方式和保存体系不一定适合分子生物学实验。
卡那霉素的配制与保存
配制方法:
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称取 Kanamycin sulfate,用无菌水配成 50 mg/mL。
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用 0.22 μm 滤膜除菌,不要高压灭菌。Merck 页面也建议无菌过滤制备无菌溶液。
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分装,-20°C 保存更稳妥。
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用时按 1:1000 加入培养基:例如 100 mL LB 加 100 μL 50 mg/mL 卡那霉素储液,即 50 μg/mL。
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倒平板时等 LB agar 冷到约 50–55°C 再加抗生素。
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项目 |
推荐做法 |
备注 |
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储液浓度 |
50 mg/mL |
用无菌水或ddH2O溶解 |
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除菌方式 |
0.22 μm滤膜过滤 |
不要高压灭菌 |
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平板/液体终浓度 |
50 μg/mL |
大多数E. coli KanR质粒适用 |
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加入比例 |
1:1000 |
100 mL培养基加100 μL储液 |
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保存 |
分装避光,-20°C更稳妥 |
短期可按供应商建议冷藏 |
结语
所以,采购时不要被 A、B、C 和各种标准品名称带偏。只要是常规 KanR 质粒筛选,认准“Kanamycin sulfate / Kanamycin A sulfate salt”即可。真正需要花精力确认的,反而是质粒图谱上抗性标记是否为 KanR、培养基终浓度是否合适,以及抗生素储液是否新鲜、无菌、未反复冻融。
参考资料
[1] Merck/Sigma-Aldrich. Kanamycin sulfate from Streptomyces kanamyceticus, K1377 product page. 该页面列出同义名 Kanamycin A / Kanamycin sulfate salt,并注明 BioReagent、粉末、细胞培养/植物细胞培养适用,以及水中溶解度和过滤除菌说明。
[2] Merck/Sigma-Aldrich. Kanamycin sulfate from Streptomyces kanamyceticus, K4000 product page. 该页面说明 Kanamycin sulfate 为来源于 Streptomyces kanamyceticus 的广谱氨基糖苷类抗生素,可作为培养基添加剂。
[3] Addgene. Pouring LB Agar Plates / Molecular Biology Reference. 常用抗生素表中推荐 Kanamycin 储液 50 mg/mL,工作浓度 50 μg/mL。
