百萤 Annexin V-Cy5标记-------检测细胞凋亡的探针-分析方法-资讯-生物在线

百萤 Annexin V-Cy5标记-------检测细胞凋亡的探针

作者:西安百萤生物科技有限公司 2023-05-12T00:00 (访问量:1337)

 Annexin V-Cy5标记是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞功能的探针,膜联蛋白是钙依赖性磷脂结合蛋白家族跟着百萤一起来看看Annexin V-Cy5标记是怎么工作的吧!

 

1. 百萤 Annexin V-Cy5标记简介和工作原理

细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。在体内,巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除,因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应,而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。 AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前,这使得Annexin V 与PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。

 

2.百萤 Annexin V-Cy5标记参数

Ex(nm)   656

Em(nm)   670

    ~36000

         Water

存储条件       在零下15度以下保存,避免光照

 

3.百萤 Annexin V-Cy5标记特点

方便:可用流式细胞仪或荧光显微镜检测;

快速:1小时内即可完成实验;

准确:能准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞,并计数各群细胞的比例。

4.百萤 Annexin V-Cy5标记数据分析

      下图是使用流式细胞仪检测膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸在Jurkat细胞凋亡中的结合活性的实例。 在活的非凋亡细胞中,膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡,其通常为所有细胞的2-6%。 在凋亡细胞中,膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸结合,磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上,导致染色强度增加。

1.在Jurkat细胞中检测膜联蛋白VmFluor Violet 450和磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃,5%CO2培养箱中不用(蓝色)或用1μM星形孢菌素(红色)处理5小时,然后用Annexin V-mFluor Violet 450染色30分钟。 使用FACSCalibur(Becton Dickinson,San Jose,CA)流式细胞仪,使用紫外激光在Ex / Em = 405 / 450nm下测量膜联蛋白V-mFluor Violet 450的荧光强度。

5.百萤 Annexin V-Cy5标记参考文献

Resources-Application Notes Phenotypic and Epigenetic Mechanism of Action Determinations of Histone Methylase and Demethylase Inhibitors using Digital Widefield Microscopy
Authors: Brad Larson, Peter Banks
Journal: Experimental Biology (2017)

Targeted Magnetic Intra-Lysosomal Hyperthermia produces lysosomal reactive oxygen species and causes Caspase-1 dependent cell death
Authors: Pascal Clerc, Pauline Jeanjean, Nicolas Halalli, Michel Gougeon, Bernard Pipy, Julian Carrey, Daniel Fourmy, Véronique Gigoux
Journal: Journal of Controlled Release (2017)

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