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百萤问号:JJ Red/JJ Green相关问题解答

作者:西安百萤生物科技有限公司 2024-04-01T00:00 (访问量:7861)

JJ Red和JJ Green是百萤生物自主研发的核酸染料,JJ Green是一种结合于所有dsDNA双螺旋的具有红色/绿色激发波长的染料,它是Gel Red/Green、SYBR、EB核酸染料的替代品。今天小萤为大家带来的是这种核酸染料的相关问题解答。

1.在使用该染料进行凝胶电泳时,Marker分辨率低的主要原因是什么?

答:①Marker的加样量:marker有一个推荐浓度范围,选择高的,样品与Marker含量差别大, 也会造成条带错误(这不会是染料的问题,用EB也会存在该问题)。正确的DNA上样量是条带清晰的保证。Marker应该选择在目标片段大小附近的梯带较密的,这样比对才准确。另外注意的是,Marker的电泳条件也要符合DNA电泳的操作标准: 如果选择λDNA/EcoR I的酶切marker,需要预先65℃加热5min,冰上冷却后使用。从而避免Hind Ⅲ或EcoR I酶切造成的粘性接头导致的片段连接不规则或条带信号弱等现象。

凝胶不平整:梳子不干净有污染,加样孔不平整也会影响图的效果;

③电泳条件:电压不稳,电泳时间不超过1h。电压过高,会导致小片段跑出胶,出现条带缺失现象。

缓冲液:TBE的缓冲能力更强,如果缓冲液缓冲性能下降,会导致DNA电泳条带模糊,不规则迁移等。TAE建议换成TBE效果更好。另外建议配胶时的缓冲液和电泳缓冲液是同时配制。

染色剂:JJ Red是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单:无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。JJ Red 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍,用JJ Red染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。可适用于多种电泳分析。注意观察凝胶时应根据染料不同,使用合适的光源和激发波长,如果激发波长不对,条带会出现模糊等情况。

 

2.在JJ Red / JJ Green性如何?

答:JJ Red / JJ Green已经被证明是替代EB、Gel、SYBR染料更为的产品。不过,请使用这些试剂时,也要遵循实验室条例等。

 

3.JJ Red / JJ Green的结合机制是什么?

答:JJ Red/ JJ Green作用原理通过静电及电荷相互作用的结合。

 

4.JJ Red / JJ Green检测下限是什么?

答:JJ Red/ JJ Green是超敏感的染料,至少可检出20pg DNA。然而,染色的灵敏度取决于仪器的性能和曝光设置等。

 

5.可以重新融化JJ Red / JJ Green凝胶,再制备吗?

答:可以,但好再添加一些染料,保证重新制备凝胶的信号强度。

 

6.可以提前制作JJ Red / JJ Green凝胶,储存供以后使用吗?

答:JJ Red和JJ Green染料是稳定的。在保证琼脂糖凝胶的完整性不会被破坏的前提下,你可以将预制的JJ Red / JJ Green凝胶储存供以后使用。我们建议在2-8℃避光贮存凝胶。

 

7.用哪些仪器检测JJ Red和JJ Green?

答:JJ Red兼容紫外透射仪和蓝光透射仪,以及基于汞弧灯和氩离子激光的凝胶扫描仪。JJ Green可使用300 nm紫外透射仪检测。

 

8.JJ Red和JJ Green可以用来染色单链DNA或RNA吗?

答:JJ Red和JJ Green可用于单链DNA和RNA的染色,但JJ Red染单链核酸效果比JJ Green敏感5倍左右。使用荧光酶标仪的滴定实验表明,JJ Red结合单链DNA和RNA荧光信号约是结合双链DNA的一半左右。

 

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