产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。含不溶性物质，使用前混匀即可。
试剂一：液体22.5mL×1瓶，4℃保存。
试剂二： 粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2mL试剂一，充分溶解，滴加0.1mL 0.2mol/L NaO至溶液澄清。
 
产品说明：
    LOX广泛存在于植物组织中，特别是黄豆种子中。LOX催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。
    LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在234nm处有特征吸收峰；测定234nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。
自备仪器和用品：
     研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液枪和蒸馏水。
 
 
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称取约0.1g样品，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。
二、测定：
1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到234 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一在25℃水浴中预热30 min以上。
3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸馏水、800μL试剂一和100μL试剂二，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A1和A2。
4. 测定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、800μL试剂一和100μL试剂二，迅速混匀后于234nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为A3和A4。
三、LOX活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。
LOX (U/mg prot) = [(A4－A3)－(A2－A1)]÷0.001÷(Cpr×V样)÷T×V反总
 = 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每克样品每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。
LOX (U/g 鲜重) = [(A4－A3)－(A2－A1)]÷0.001÷(V样÷V样总×W)÷T×V反总
= 10000×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷W
    Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；W：样品质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；V样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间，1min。V反总：反应总体系，0.2ml。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.0006个单位为1U。
LOX (U/mg prot) = [(A4－A3)－(A2－A1)]÷0.0006÷(Cpr×V样)÷T×V反总
 = 16667×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
活性单位定义：在1mL体系下，25℃中每克样品每分钟催化吸光值变化0.0006个单位为1U。
LOX (U/g 鲜重) = [(A4－A3)－(A2－A1)]÷0.0006÷(V样÷V样总×W)÷T×V反总
 = 16667×[(A4－A3)－(A2－A1)]÷W
    Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，需另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；W ：样品质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；V样总：上清液总体积，1mL；T：反应时间，1min；TUNEology 波长可调检测卡盒-->