5-(和6)-羧基 SNARF-5F 琥珀酰亚胺酯是一种高效胺反应性pH传感模块，可直接用于构建基于SNARF-5F的比率型pH荧光探针。该分子可通过其琥珀酰亚胺酯基团与蛋白质、抗体、多肽及氨基修饰的核酸等生物分子中的伯胺（-NH₂）在生理相容条件下实现稳定、定向的共价偶联，从而将pH响应功能精准引入目标体系。

该探针的pKa值约为7.2，使其尤其适用于监测近生理pH范围（约6.5–8.0）内的动态变化，广泛适用于细胞质、细胞外微环境及多种生物流体的pH跟踪。其光谱行为呈现典型的SNARF家族特征：在酸性条件下以黄橙色荧光为主（最大发射约580 nm），在碱性条件下则转为深红色荧光（最大发射约640 nm）。该光谱位移高度可逆、响应迅速，且具备良好的光稳定性与细胞相容性。

基于其双发射比率测量特性，通过同步采集580 nm与640 nm处的荧光强度并计算其比值，可有效校正探针分布不均、仪器波动、光漂白及样品厚度差异等因素引入的系统误差，从而在活细胞成像、流式细胞分析、微孔板检测及组织水平观测中，实现对pH的可靠、高精度定量分析。

此外，该探针在细胞代谢研究、细胞内吞与胞吐过程追踪、药物释放监测以及肿瘤微环境酸化分析等前沿领域均有重要应用，为从单细胞到整体样本的酸碱生理学研究提供了灵敏而稳定的光学工具。