使用CESI-MS技术分离检测单克隆抗体的蛋白亚型以及抗体的纯度
CE和MS分别是单克隆抗体的电荷异质性、纯度以及分子量表征的重要方法。而将CE与MS结合起来，我们就可以将单克隆抗体的电荷异质性、纯度以及分子量等几种表征结合到一次分析中来完成。此外，高分辨的质谱检测技术可以帮助我们鉴定未知的CE峰。相对于光学检测，也可以获得更为准确的纯度信息和分子量信息。
样品制备：在CESI-MS技术的实验中，IgG1，IgG2以及IgG4的溶液（浓度为20 mg/mL）使用脱盐柱（Thermo Fisher Scientific）脱盐，然后溶解在50mM（pH 4）的醋酸铵溶液中。IgG的还原是向IgG的溶液中加入10 mM的 二硫苏糖醇和0.1%的Rapigest SF表面活性剂（Waters），然后在60 ℃下恒温45分钟。加入0.5 %的甲酸，37 ℃恒温10分钟，将Rapigest切断，随后加入沉淀剂将Rapigest去除。然后向溶液中加入高浓度（2 M，pH 4）的醋酸铵使其终浓度为50 mM。单独使用CE时，IgG分子被溶解在两性电解质的溶液中（cIEF）或者SDS的凝胶溶液中（CE-SDS）。在SDS凝胶溶液中的还原反应是在60 ℃下进行的，加入10 mM二硫苏糖醇，恒温10分钟。
CESI 8000与质谱联用时的条件：CESI的实验使用的仪器是SCIEX CESI 8000 Plus系统。该系统具有控温的自动进样系统，最大电压为30 kV的高压系统。使用的毛细管是中性涂层毛细管，毛细管的尖端经过腐蚀形成一个电喷雾的喷口。分离过程中的缓冲溶液和导电溶液是3%的醋酸。进样压力为5 psi，进样时间为10 s，进入毛细管的样品体积约为7.5 nL。由于样品是溶解在50 mM的醋酸铵中，因此在进样之后会有一个瞬态的等速电泳过程将样品进行堆积。预分离过程中，分离条件为：电压30 kV，压力2psi，分离时间为7 min。然后将压力增大到10 psi分离10 min，并进行电喷雾。
结果与讨论
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