PeproTech重组细胞因子常见问题解答-文献综述-资讯-生物在线

PeproTech重组细胞因子常见问题解答

作者:上海朗顿生物技术有限公司 2010-06-02T00:00 (访问量:7741)

PeproTech公司的重组细胞因子产品经过了十分严格的生产、纯化及质检过程,保证其在投放市场之前,达到如下要求:
1. 真实性:重组蛋白产品一致经过N末端氨基酸序列分析;必要时应用SDS-PAGE, RP-HPLC和质谱(MS)检测其真实性。
2. 纯度:应用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析产品纯度。
3. 生物活性:进行相应的体外(in vitro)或体内(in vivo)活性检测。
4. 蛋白含量:通过紫外光谱分析,SDS-PAGE电泳检测;必要时应用HPLC定量标准蛋白溶液。
5. 内毒素:kinetic LAL法检测内毒素。
6. 微生物:重组蛋白在装瓶之前都经过滤除菌处理。
产品随附的说明书上载有产品的各项相关信息。请仔细阅读这些信息,了解其配制和贮存提示。如果在阅读说明书后仍需更多信息,请查看以下常见问题解答,或致电我们的技术服务部门。
 
重组细胞因子的冻干状态
      与市场上已有的其他蛋白产品不同,PeproTech细胞因子不含carrier protein或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等),而是以低盐的形式做冻干处理,因此微量的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内,
形成很薄或不可见的蛋白层。PeproTech的质控过程确保每管装有非常准确量的蛋白产品。所以我们建议在收到试剂后,务必于开盖前先离心20-30秒,使可能附于管盖或管壁的蛋白成分聚集于管低(此时能否见到白色沉淀均属正常现象)。
重组细胞因子活性单位(units)的换算
        各公司在开发出重组细胞因子并检测其活性后,通常会以ED50(半数有效浓度)或units(活性单位)来标识其细胞因子的生物活性。因此1mg细胞因子中所含的活性单位(units)可以理解为将1mg/ml细胞因子原液稀释成ED50的稀释倍数,
以下是二者的换算公式:
                                                                                      1x106
                                                                          _______________     = specific activity (units/mg)
                                                                                 
                                                                                ED50(ng/ml)
重组细胞因子的稳定性
        除非产品说明书上另有特别说明,否则所有PeproTech蛋白产品都为冻干粉形式,在室温下也能保持很好的稳定性。但是,我们推荐冻干产品最好保存于-20℃。大多数冻干产品经溶解和稀释后,可短时间保存于4℃;若要进行较长时间保存,
我们建议稀释到工作液浓度并加入一定的carrier protein(如0.1% BSA),然后分装保存于-20℃。请注意每一次冻融过程都会造成蛋白的部分变性,应避免反复冻融。
重组细胞因子的交叉活性
        除了少数例外,大多数人类细胞因子对小鼠细胞都有活性。许多小鼠细胞因子对人类细胞也有活力表现,但是与相应的人类细胞因子相比比活力较低。一些人类的细胞因子如IL-7在小鼠细胞中甚至表现出比相应的小鼠细胞因子更高的比活力。
而干扰素、GM-CSF、IL-3 和IL-4 是物种特异性的,对于非人类细胞几乎没有活性。相反,成纤维细胞生长因子 (FGFs) 和神经营养因子 (neurotrophins) 是高度保守的,在其它的动物物种细胞中也能表现很好的活性。


.离心(Centrifuge):高速离心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速离心 (2, 000 rpm) 5 分钟。
2.溶解(Reconstitution):用去离子水或其它缓冲液(根据说明书要求进行选择)溶解至说明书要求的浓度 (一般为 0.1-1.0 mg/ml)。溶解时不可振荡,避免因化学键的断裂造成蛋白失活,可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间,待细胞因子完全溶解后使用。溶剂的选择:
1)要求用去离子水溶解的产品,务必不可用盐溶液,避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用盐溶液溶解的产品,请依照说明书上的浓度,同样也是为了避免过高的盐浓度。
3.分装和贮存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液,稀释可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液。工作液在4℃可保存1 周,如需长期保存,最好在稀释液中加入10%的FCS(小牛或胎牛血清)或0.1 %的BSA(牛血清白蛋白)或5% HAS(人血清白蛋白)来稳定蛋白,然后需分装冻存于-20℃ (注意:不可冻存于-50℃以下)。分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量,以实现每次实验用完一支工作液,避免反复冻融引起蛋白活性的降低。
 
细胞因子量极微,所以严谨的操作是必需的,任何不适当的溶解都会造成实验的失败,造成大量的浪费。请谨慎操作!

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