• 快速、简单的 ELISA 实验流程设置
• 无需三级实验室或细胞培养
• 实验结果与蚀斑减少中和试验数据一致
• GenScript cPass 新冠病毒中和抗体检测试剂盒 (GenScriptcat. #L00847-A),
• 10 份血清样本,已经通过 PRNT (Corgenix) 方法证实中和抗体阳性,
• 3 份血清样本,已经通过 PRNT (Corgenix) 方法证实中和抗体阴性,
• MultiWash+ 微孔板洗板机 (Molecular Devices)
• 光吸收检测模式用到的 Molecular Devices 酶标仪:
• SpectraMax ABS Plus 酶标仪
• SpectraMax iD5 多功能酶标仪
• SpectraMax i3x 多功能酶标仪
• SpectraMax M5e 多功能酶标仪
在实验开始前,试剂盒的所有组分和待测样本可放置于室温。试剂盒中的试剂需要按如下操作稀释:
• 用去离子水稀释 20x 储液得到 1x wash,
• 用 HRP 稀释缓冲液按 1:1000 比例稀释 HRP-RBD 储液得到HRP-RBD 工作液。待测样本 和实验对照组分别与 HRP 偶联的 RBD 混合,并按如下操作孵育。待测样本、阳性对照、阴性对照,分别用样品稀释缓冲液按 1:10 比例稀释,例如:12uL 待测样品 + 108uL缓冲液。将稀释后的样品和对照组分别与等量的 HRP-RBD 工作液混合在不同的试管中,例如:120uL HRP-RBD 工作液 +120uL 稀释后的待测样品或对照品。此混合物在 37 度孵育15 分钟。
分别添加 100uL 的阳性对照混合物、阴性对照混合物、待测样品混合物至实验复孔中。然后封盖,在 37 度孵育 15 分钟。使用 MultiWash+ 洗 板 机 和 1x wash 溶液清洗所有的微孔板,每次每孔 300 uL,横向吸液。然后,100uL TMB 溶液加入到每个孔中,封盖,避光,室温孵育 15 分钟。与 TMB 底物孵育后,50 uL 终止溶液加入到每个孔中,立即在多款酶标仪上测读,光吸收波长设置为 450 nm。
实验结果的有效性评估看阴性对照的 OD450 值是否大于 1.0,阳性对照的值是否小于 0.3。如果不符合这些标准,实验结果无效,需要重复试验。各个待测样本的百分比抑制值按如下公式计算:表 1 的卡值被用来说明样本的结果是阳性还是阴性,是否存在可检测到的新冠中和抗体。表中的卡值来源于新冠 sVNT 试剂盒手册。对于不同地区和种族背景,使用者可以直接基于具有代表性的患者血清样本设置卡值。
使用阳性和阴性对照评估实验结果的质量。如表 2 所示,阴对照的 OD450 值大于 1.0,阳性对照的 OD450 值小于 0.3,这是根据 sVNT 试剂盒的质量控制要求而定。