文献解读:PDCD5调控细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡

来源: 武汉金开瑞生物工程有限公司   2018-4-10   访问量:1363评论(0)

题目:PDCD5 regulates cell proliferation, cell cycle progression and apoptosis
期刊:Oncology letters
研究背景
PDCD5Programmed cell death 5)是程序性细胞死亡蛋白家族成员,同肿瘤细胞生长及凋亡密切相关。为了研究PDCD5的分子及细胞功能,本文通过慢病毒载体构建了稳定过表达PDCD5的人表皮癌细胞A431细胞株,检测了该细胞株的细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡,并进一步验证了PDCD5在肿瘤生长过程中是否通过p53行使相关功能。本研究说明了PDCD5在肿瘤发生过程中的分子功能,PDCD5作为肿瘤抑制因子,在肿瘤治疗中可能成为潜在靶分子。
研究内容及结果
1. 慢病毒包装及过表达稳转株构建
本文所使用的PDCD5过表达慢病毒及稳定过表达PDCD5A431细胞株订购自武汉金开瑞生物工程有限公司(GeneCreate Biological Engineering Co.,Ltd)。通过WB及荧光定量PCR实验证明PDCD5A431细胞株中显著过表达(Fig.1 A.B.C)。

2. MTT细胞增殖实验
以空载体感染细胞为对照组、以PDCD5过表达A431细胞为实验组进行MTT实验,分别在12h24h48h72h监测数据,绘制生长曲线,可见在72-96hPDCD5过表达组的增殖显著受到抑制(Fig.2)。

3. 流式细胞术检测细胞周期及凋亡
为了进一步研究PDCD5对于癌细胞增殖抑制的机制,利用PI染色后进行流式细胞术分析,结果显示PDCD5过表达的A431细胞出现G2/M周期阻滞(Fig.3 A.B)。

为了考察PDCD5对于肿瘤细胞凋亡的影响,使用Annexin V/PI染色及流式细胞术检测过表达PDCD5A431细胞凋亡,显示PDCD5过表达组凋亡比例显著升高(Fig.4 A.B)。

4. WB及荧光定量PCR检测PDCD5P53及细胞凋亡相关通路蛋白表达水平
为了进一步研究PDCD5对于肿瘤细胞增殖抑制、周期阻滞的内在机制,通过WB和荧光素定量PCR检测p53baxbcl-2casp3在蛋白和mRNA水平的表达,发现p53baxcasp3表达升高,bcl-2表达降低(Fig.5 A.B.C)。

文章小结
本文利用慢病毒构建的PDCD5稳定过表达A431细胞株为实验模型,发现PDCD5过表达细胞体增殖受到抑制、细胞周期于G2/M期阻滞、细胞凋亡率增高。进一步研究证明PDCD5过表达细胞中p53表达水平升高,凋亡通路相关基因baxcasp3呈现过表达、bcl-2基因表达降低。PDCD5可能通过经典凋亡信号通路机制影响肿瘤的生长。
解析文献
Penghui Li et al. PDCD5 regulates cell proliferation, cell cycle progression and apoptosis. Oncology letters,2017,15: 1177-1183
参考文献
1. Hipfner DR and Cohen SM: Connecting proliferation and apoptosis in development and disease. Nat Rev Mol Cell Biol, 2004, 5: 805‑815.
2. Löbrich M and Jeggo PA: The impact of a negligent G2/M checkpoint on genomic instability and cancer induction. Nat Rev Cancer, 2007, 7: 861‑869.
3. Alenzi FQ: Links between apoptosis, proliferation and the cell cycle. Br J Biomed Sci, 2004, 61: 99‑102.
4. Liu H, Wang Y, et al: TFAR19, a novel apoptosis‑related gene cloned from human leukemia cell line TF‑1, could enhance apoptosis of some tumor cells induced by growth factor withdrawal. Biochem Biophys Res Commun, 1999, 254: 203‑210.
5. Wang N, Lu HS, et al: Involvement of PDCD5 in the regulation of apoptosis in fibroblast‑like synoviocytes of rheumatoid arthritis. Apoptosis, 2007, 12: 1433‑1441.



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