生物素亲和素ELISA系统介绍

来源: 武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司   2018-7-11   访问量:225评论(0)

生物素亲和素(又称抗生物素)系统(biotin avidin system,BAS)标记抗体的技术是20世纪70年代后期发展起来的一种新的免疫检测方法。由于亲和素与生物素间的亲和力极强,结合迅速,且极其稳定,生物素标记抗体和酶的标记率高,又不影响蛋白的活性,使BAS标记技术比常规酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技术有着更高的灵敏度,为微量抗原、抗体的检测开辟了新的途径。近年来,在BAS检测中多用链霉亲和素“streptavidin,SA”,它是链霉菌培养过程中的分泌物,完整的链霉亲和素和从卵白中提取的亲和素一样,也由4条相同的肽链组成。因链霉亲和素在检测应用中发生的非特异性结合远较亲和素低,因此日渐受重视,已有取代亲和素之势。


各种抗体或酶的标记物在国内已有商品供应,使用方便。BAS ELISA具有的特点:

①对于所有的抗原抗体系统,包括免疫细胞化学、ELISA、免疫印迹法等都适用,应用范围极广;

②BAS在温和条件下可与各类生物大分子如蛋白质、脂多糖等结合,并且这种结合对原生物大分子的生物活性无影响;

③每个亲和素分子可与4个生物素分子结合,所以可以偶合更多连接生物素的酶分子,从而大大提高了灵敏度;

④生物素和亲和素间亲和力强,故二者一旦结合,就极为稳定,不受在ELISA方法中的保温及多次洗涤影响,而且这种结合反应时间比抗原抗体反应所需时间短;

⑤结果专一性强,非特异性显色或染色背景极低;

⑥第一抗体稀释度高,可节约抗体。


原理

生物素或亲和素与抗体分子或标记物结合后,既不影响前者的亲和力,也不改变后者的特性。亲和素分子的4个活性部位并非都和连接在抗体分子上的生物素残基结合,剩下的游离部位尚可作为另一种生物素标记蛋白质的受体。这些特点就是BAS免疫标记技术的基础和原理。

BAS基本检测方法可分为两大类,一类以游离亲和素居中,分别连接生物素化大分子反应体系和标记生物素,称为BAB法或桥联亲和素生物素法(bridged avidin biotintechnique,BRAB),其改良法称为(avidin biotin complex,ABC)法。另一类以标记亲和素连接生物素化大分子反应体系,称为BA法或标记亲和素和生物素法(LAB)。现分别介绍如下:

1.BA法亦称LBA法。系将特异性抗体生物素化,将酶分子标记在亲和素分子上,生物素化抗体与被检抗原结合后,再借BAS的高度亲和力将酶分子联结到抗原分子上,经酶促反应即可检出抗原。

2.BAB法亦称BRAB法。系将特异性抗体生物素化,将酶分子标在生物素上,然后以游离亲和素桥联物,使被检抗原、生物素化抗体和酶标生物素联成一体。

3.ABC法原理与BAB法基本相同,只是亲和素和酶标生物素需要先按一定比例形成ABC复合物,这种网络结构结合了大量的酶分子,当亲和素尚未被酶标生物素饱和时,生物素化抗体即可与之结合。

以上便是BAS ELISA的三种基本检测法。上述方法中,如将第二抗体生物素化,即为间接法。由于间接法增加了一级抗原抗体反应,因而比直接法更敏感,应用范围更广。近年来许多学者对上述基本方法进行了改良,有人用亲和素抗体或A蛋白作桥联物。另外还发展了BA ELISA竞争法和抑制法等



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