Thermo Scientific 抗体药解决方案

来源: 赛默飞世尔科技--实验室产品   2018-8-15   访问量:1515评论(0)

 


Thermo Scientific抗体药解决方案

篇首语

全球抗体药物市场增长强劲,被业内认为是生物制药产业中最为活跃的组成部分,已成为未来生物医药领域发展的“潜力股”。

随着国家医药生物产业规划升级的推动,中国的抗体药将迎来新的发展机遇期。

前期研发:文库筛选和效价测定

抗体药前期研发的核心是文库筛选,获得高特异性、高亲和力单克隆抗体。主流文库筛选有两大技术平台:噬菌体/酵母展示文库筛选和杂交瘤细胞筛选。

1、噬菌体/酵母展示文库筛选

文库筛选又称Biopanning,通过“结合-清洗-洗脱-扩增”多轮循环操作,筛选出特异性强,亲和力高的单克隆抗体。传统筛选多基于96微孔板,步骤繁琐,结果一致性差。

Thermo Scientific™ Kingfisher Flex™磁珠纯化系统是新一代自动化噬菌体文库筛选平台,将手动筛选过程实现自动化。《抗体工程》2010版将Kingfisher Flex作为自动化文库筛选标准化流程予以推荐。美国Recombinant Antibody Network成员也都采用Kingfisher Flex进行自动化文库筛选。

Kingfisher Flex包含8个板位,各板位分别放置噬菌体库及用于淘洗的Wash bufferElution buffer,通过96磁头实现磁珠在不同板位间的转移,实现高通量淘洗。整个过程条件可控,包括淘洗强度、温度、结合和洗脱时间等,一致性好,便于标准化操作。

Thermo Scientific™ Cytomat 2C TOS™自动化振荡培养箱实现噬菌体扩增培养的自动化及通量的提高,专有的双磁头驱动设计保证箱体内载板架上层和下层振幅的一致性,实现良好的培养效果。

2、杂交瘤细胞筛选

杂交瘤细胞筛选关键是杂交瘤细胞的单克隆化,经典方法是采用有限稀释法,形成单细胞克隆,通过ELISA检测培养基上清效价,确定阳性克隆。

杂交瘤细胞快速分液

Thermo Scientific™ Multidrop Combi™微孔板自动分液器可以实现快速的细胞分液。10秒钟即可自动完成一块96孔板每孔100μL的细胞分液,整个过程自动化、快速、一致性高。

高通量杂交瘤细胞培养

Thermo Scientific™ Cytomat™培养箱是基于贺利氏技术的自动化培养箱,使用Cytomat 48C可以将通量提高到1008块标准板,实现细胞培养的自动化和标准化。

单克隆抗体效价测定

对培养后的杂交瘤细胞单克隆进行筛选,获得高亲和力、高特异性的单克隆抗体。筛选的原理基于抗原、抗体间相互作用,经典方法是基于微孔板的高通量ELISA筛选。

整个抗体筛选流程中ELISA检测通量非常大,整合Thermo Scientific™Orbitor™机械臂、Thermo Scientific™ Wellwash Versa™洗板机、Multidrop Combi分液器及酶标仪的自动化ELISA检测系统,可实现自动化高通量的ELISA检测。



Thermo Scientific™ Varioskan LUX™多功能酶标仪作为通用检测平台,可进行包括光吸收、荧光、化学发光、时间分辨荧光、HTRFFRETAlpha等多种方式检测。例如PD1/PDL1相互作用研究就可以通过Varioskan LUXHTRF检测功能来实现。

3、单克隆抗体热稳定性测定

抗体蛋白热稳定性是一个重要检测指标。借助Protein thermal shift分析技术通过Tm值的变化可以直观判定抗体蛋白的热稳定性。ThermoScientific™ QuantStudio 7 Flex™实时荧光定量PCR系统及其配套的Protein Thermal Shift试剂及软件可以很好的检测抗体蛋白Tm值的变化,以及促进蛋白稳定性的缓冲液条件的优化。




抗体生产+质控

1、生产:

对筛选出的单克隆抗体噬菌体或杂交瘤细胞,将抗体基因转入到生产型细胞表达株,如CHO细胞进行大规模的培养和抗体表达,建议采用一次性生物反应器、一次性发酵罐进行生产。


一次性生物反应器:适用于动物细胞、悬浮型细胞的培养,可用于批次、补料和灌流培养。

一次性生物发酵罐:适用于要求较高的微生物发酵,易于从玻璃罐迅速放大到300L规模,适合新药平台。



离心机:从中试到放大生产,需要有强大的离心设备。ThermoScientific™ Sorvall BIOS™ 16大容量离心机专为生物制药生产及GMP量身定制,具有腔门自动开启及关闭的Auto-Door功能,实现自动化控制;具有远程数据监控及原始数据追溯的功能,实现数字化管理;Centri-Touch高灵敏度液晶触控屏控制功能,增加了易用性。



2、质控:

对获得的单克隆抗体药物需要进行一系列的质控检测,包括宿主细胞DNA残留检测、宿主细胞蛋白残留检测、微生物检测、内毒素检测、纯度检测等,以达到FDA/CFDA的监管要求。

质控检测试剂盒:

• MycoSEQ 宿主支原体检测

• ViralSEQ 病毒检测

• MicroSEQ 微生物测定

• GlycanAssure 糖型分析

• resDNASEQ 宿主细胞DNA残留定量

• ProteinSEQ 蛋白ACHO宿主蛋白残留定量


Kingfisher Flex磁珠纯化系统

基于磁珠法的Kingfisher Flex磁珠纯化系统可进行多种质控检测样品的高通量自动化制备,包括DNA残留、Protein A残留、HCP(宿主细胞蛋)残留检测及支原体检测等。


Thermo Scientific™ Multiskan ET™专为内毒素检测优化设计光路,是一款专业的内毒素检测设备,适用于各种内毒素检测试剂盒。



超高效液相系统

对于单克隆抗体的分离纯化采用兼具模块化与灵活性的Thermo Scientific™ Vanquish UHPLC™进行高灵敏、快速的分离,并能对样品进行纯度、滴度的分析。



自动化整合系统案例


UCSF自动化抗体筛选平台

(RANRecombinant Antibody Network成员)

整合功能模块:

单克隆挑选 Kbiosystems K6-2

细胞培养 Cytomat

噬菌体淘洗 Kingfisher Flex

液体处理 Liquid handling

• ELISA检测 Microplate reader & wahser

抗体热稳定性测定 qPCR




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