Opal/TSA 多标记染色技术--——多标记免疫荧光的新世界!

来源: 北京亿鸣复兴生物科技   2019-2-28   访问量:3012评论(0)

免疫组织化学染色及成像分析是研究组织形态和组织原位抗原表达不可或缺的检测技术,广泛应用于临床病理诊断和医学及生物学研究的各个领域。组织切片样本中蕴含着丰富的信息,但是受制于传统单标记免疫组织化学染色方法的限制,通常只能对组织中的一到两种抗原进行染色分析,最多3种抗原,而且定量结果的判读往往依赖于肉眼观测,缺乏客观标准。随着蛋白组学的发展,对现代组织学分析提出了更高的要求,例如不同的蛋白共表达和共定位分析、低丰度分子的检测、异质性分析、细胞表型统计乃至复杂组织微环境的描绘等,都需要在同一张组织切片样本上同时检测多种靶标分子。这对于理解组织微环境中各种细胞间的关系,推演信号通路上下游蛋白表达的关系,制定临床诊断和治疗方案都有着非常重要的意义。



然而,在2017年,突然出现一种新技术——多光谱组织成像技术应用在几十篇SCI文章中,利用这种新技术阐述了肿瘤免疫、肿瘤微环境中各种机制。

下面给大家列出一些例子:


1 乳腺癌中CD8/Ki67/GZMB的定位和定量

2 肝癌组织中淋巴细胞的区分

Chunhong et al., Cell,2017






3多光谱组织成像技术在人胰腺癌中分析细胞独特组成
Julienne et al., nature communication,2017




4 结肠癌中IL-33/CD31的定位和定量

Min et al., Cancer reserch,2017

上述四个例子只是2017年发表的几十篇文章中的小部分,那么为什么这个技术突然这么热火呢?下面给大家简单降解一下这个技术的优势。

多光谱组织成像技术的优势重点在三部分,首先第一部分是染色方面:这是一种基于酪胺信号放大(TSA)技术衍生而来的多标记免疫荧光染色方法,能够在同一组织切片样本上复染7 种以上抗原并进行区别标记,不限一抗的种属来源限制,因此只要您想在某个组织上探究某个蛋白的定位和定量,只需要有此抗原的相应抗体即可。若您想具体了解染色机理,可以联系我们北京亿鸣复兴生物科技有限公司。

优势的第二个部分是采集图像:新技术采用光谱照相机,多光谱成像是检测复杂染色样品信号的有效手段,不仅能对混杂的各色信号进行识别,而且能够去除自发荧光的干扰。实现多光谱组织成像系统。

最后的优势是一个最新的软件分析数据。inForm是已获专利的自动图像分析软件,可以准确地定置组织切片中的生物标记物。能够在单细胞水平进行免疫组化、免疫荧光和原位RNA杂交分析,而且允许在单个和多重实验中对微弱的光谱重受标记物进行分离和测定。inForm使用已获专利的"自学习"算法自动对特定组织类型进行检测、分割,该软件就像一名专业病理学家,通过鉴别组织的形态模式来找到特定的组织类型。主要特点是定量分析组织切片和组织芯片中生物标物的表达量;分离重叠的微弱标记信号;对H&EIHC染色和免疫荧光标记的固定组织进行细胞分析;借助"自学习"软件算法自动识别特定的组织类型。配合光谱成像技术和定量分析软件,能够将组织中蕴含的丰富信息准确的呈现出来。这套流程化的分析方案为临床诊断和基础科研提供了更高精度和更可靠的组织学数据,将免疫组织化学分析的技术水平提升到一个新的高度。

技术对比

Opal/TSA多标记免疫荧光

传统免疫荧光

靶点数目

不受限制(最多可同时染色7种)

一般标记3种(含DAPI

一抗种类

同一种属的不同抗体即可满足要求

不同种属的不同抗体

二抗种类

连接辣根过氧化物酶的同种属二抗

连接荧光探针的不同种属二抗

染色策略

任何样本无需任何染色策略,简单的重复前一步的染色过程,样本/靶点的差异不影响染色过程,使用简单方便

样本抗原的空间位置的差异,需要设计复杂的染色策略。样本/靶点的差异导致染色策略的差异,染色过程复杂、多变

染色效果

高染色分辨率和染色特异性,信号强度强,淬灭时间更长,无背景影响,各靶点的信噪比大大提高,尤其适合组织基于单细胞的定量分析

亮度较弱,容易淬灭,各种抗体间存在互相影响,背景较高,对基于单细胞的定量分析不利

应用范围

二抗具备通用性,因此实验室中所有的研究领域均可使用

二抗不具备通用性,实验室中应用领域受到局限



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