实验小白白巧度“ChIP”苦海,不是没办法

来源: Cell Signaling Technology,Inc(China)   2019-7-18   访问量:2025评论(0)

 

实验小白白巧度“ChIP”苦海,不是没办法

  

 

 

 

原创:Curtis D原文翻译
校对:一茗惊人
转自:CST博士互助平台
 
当你需要证明目的蛋白可以直接调节基因表达时,大概会悻悻地暗想:“Oh no! 要做ChIP实验了……” 

 

对,就是染色质免疫沉淀,就连实验名称也很长,看着就让人气馁。不过不用担心,振作起来,带上护目镜,拿上移液管,有办法让你轻松、帅气地拿下实验。

 

对于每项实验,一开始,我们都是小白出身,拿我来说,以前我只研究蛋白,常用方法也就是WB和IF,从没有做过ChIP 实验。 

 

后来在做ChIP实验的过程中,问题也层出不穷:对于每次免疫沉淀,我需要多少细胞?那么多?!我可以少用点吗?原代细胞怎么样?组织怎么样?天哪,我是不是还在第一个步骤?这个实验到底有多少个步骤?

 

一开始,我在每个实验步骤中都可能犯错。有时候染色质剪得太小了,有时候又没有把染色质片段剪切到足够小;有时候在剪切缓冲液中使用了太多的去垢剂,有时候又使用了太少的去垢剂;有时候在免疫沉淀步骤中没有添加足够的抗体,有时候又在免疫沉淀步骤中添加太多的抗体……

 

 

有一次,我在 DNA 洗涤步骤中甚至忘记了更换离心柱,把我那刚刚分离出准备用于 PCR 的 ChIP DNA 直接转入了废乙醇中,做了两天的实验和养了两周的细胞都给白白作废了。甚至还出现过使用了品质低劣的磁珠、离心柱和 PCR 试剂,导致实验质量大大降低的情况。大家都知道,做科研,我们没有过多时间可以浪费,也没有那么多科研经费容我们试错,所以每当遇到这样挫败的时候,我都心想,“唉,到底是为了啥,我为什么要做这个?”
 

 

因为我犯过这些错误,浪费了不少时间,所以我不希望你们重蹈覆辙。Cell Signaling Technology(CST) 有我协助开发和改进的试剂盒的专用实验步骤。我们找到了最佳的试剂,并装在我们的 ChIP 试剂盒(表1中。我们知道需要多少细胞才能真正获得良好的结果,发现了为什么我们的低去垢剂剪切缓冲液优于传统的商品级缓冲液,我们会滴定所有抗体来确定你们实验所需的最佳用量(这个量根据抗体本身的亲和力不同而有所变化),也知道构建一个 ChIP-seq 库需要多少毫微克的免疫沉淀 DNA。你在实验中可能出现的诸多问题,我们在实验台前也已经弄明白了。
 
表1:ChIP试剂盒
 
我亲自为数百人提供过实验步骤方面的帮助。我花了上千个小时通电话、写电子邮件和分析用户数据。几年来,我每周进行了 80 多次染色质免疫沉淀,运行了成千上万个 PCR 周期。如今我把所有这些经验都变成知识,并传授给你们。使用我们的 ChIP 试剂盒和抗体,你可以就按我曾经做的方法来获得和我们说明书上一样优秀的结果。

 

有时,当我的试剂不足时,我会直接到我们的物流部取一个试剂盒箱。如果你也出现这样的情况,不妨浏览一下我们的网站。查看我们提供的实验步骤、ChIP 试剂盒和抗体。给这个“令人气馁”的实验配上所需的所有工具。
 

点击查看CST提供的ChIP试剂盒和试剂

 
我从一开始没有线索,到有能力胜任ChIP实验,再到帮助别人解疑答惑。既然我能成功,那么你们也能。如果你需要证明直接基因调控功能,别害怕自己的ChIP实验会反复失败。如果你需要帮助,只需给我们发送电子邮件(tech@cst-c.com.cn) 或打电话 (4006-473287/GreatQ) 即可。
 

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