想要感染效率高,吉凯教你小妙招

来源: 上海吉凯基因化学技术有限公司   2019-8-20   访问量:1721评论(0)

想要感染效率高,吉凯教你小妙招


想要感染效率高=病毒越多越好?


相信很多同学在做病毒感染操作时,为了提高感染效率,往往会选择多加入一些病毒。可很多时候病毒加多了,细胞状态却变差了。这是什么原因造成的呢?更多的时候,病毒加了不少却还是达不到想要的效果,有更好方法可以增加感染效率吗?

今天来给大家来做一次小科普。不想花时间看原理,只想知道怎么做的小伙伴,直达文末↓↓↓

首先来看看,慢病毒产生细胞毒性的原因。了解了原因,我们才好针对性的找对策嘛。


1. 杂质

病毒溶液中含有的杂质蛋白、内毒素等对细胞造成的毒性(想了解的,请看上一期:加了病毒后,细胞半死不活?可能是你的病毒不够“纯”)。特别对于某些外源刺激敏感的细胞来说,严重时将导致细胞死亡。这是病毒感染细胞后,状态差异的主要原因。

低纯度慢病毒(1,2,3,4)与高纯度慢病毒(5,6)SDS-PAGE电泳对比图。红色框线处(约72kDa)为病毒外壳蛋白,其余为杂质蛋白

2. 过度感染

外源基因的过度表达,会导致目的细胞本身正常新陈代谢失衡。这是有些细胞过感会死亡的主要原因。

所以说,为了提高感染效率,可以适当增加MOI,但加入的病毒绝不是越多越好。对于敏感细胞来说,用高滴度高纯度的慢病毒,可以减少病毒中的杂质对细胞状态的影响。同时,不建议追求太高的感染效率,能够达到~80%的感染效率即可满足大部分实验需要。

我们再来看第二种情况:病毒加了不少,还是达不到想要的效果,可以使用什么方法增加感染效率?

那就得从影响慢病毒感染效率的因素说起了:

1. 细胞膜的流动性

2. 细胞膜表面受体的表达丰度

3. 病毒与细胞的接触面积和接触几率

4. 细胞膜与病毒外壳蛋白电荷的多少



专业的事情交给吉凯基因我们从大量的文献及实际操作中总结了增加感染效率的方法,大家可以根据自己的实验条件,选择性的使用:

1. 调整细胞状态,感染时使用对数期的细胞:增加细胞膜的流动性

2. 降低感染时血清浓度,使用无血清/低血清的培养基:降低血清蛋白对病毒外壳蛋白的封闭

3. 离心法,感染时将细胞培养板密封,用平角转子离心机1000g离心1h,再放回培养箱中正常培养:增加慢病毒与细胞的接触几率,但对细胞有一定的机械损伤,仪器要求高

4. 感染时加入Rentronectin等纤粘蛋白:增加慢病毒与细胞接触几率,但会影响细胞的贴壁状态

5. 使用传统的感染试剂,如Polybrene:中和细胞膜和病毒粒子之间的电荷排斥,但Polybrene本身就具有细胞毒性,部分细胞对Polybrene敏感,容易导致细胞状态变差、形态发生变化、甚至死亡

6. 使用新一代感染试剂Hitrans G:相比Polybrene,可显著提高细胞感染效率,且对细胞毒性极低,更适合敏感细胞使用




小结:

1.用高滴度高纯度的慢病毒,可以减少病毒中的杂质对细胞状态的影响。

2.使用对细胞毒性低的感染试剂,如Hitrans G,可在显著提高感染效率同时保证细胞状态。

3.避免过度感染,一般来说,80%的感染效率即可满足实验需要。



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