简介 QuantSeq 3’mRNA-Seq文库制备试剂盒生成Illumina兼容的文库，主要针对富含poly(A)RNA的3’端进行测序。每个转录本只生成一个片段，因此不需要进行读长归一化，最终得到精确的基因表达值。 QuantSeq主要有两种试剂盒： 第一种试剂盒（Cat.NO.:015.96）:通过OligodT生成NGS读长，精确找到3端，并对其进行双端测序，这种QuantSeq试剂盒的读长可直接反映出mRNA的序列。 第二种试剂盒（Cat.NO.:016.96）:在Read1生成的过程中，可精确找到3端，Read1生成的读长可反映出cDNA序列，为使该试剂盒可用于Illumina平台的簇生成所需，首先要进行T-fill反应。 QuantSeq的链特异性高于99.9%，可以定位到基因组上相对应的序列，发现并定量新的反义转录本及重叠基因。 工作流程 QuantSeq工作流程简单，整个流程仅需要4.5小时（如图）。手工操作时间不超过两小时。总的RNA的量最低仅需要50ng，无需进行poly(A)富集或者rRNA的去除。 以oligodT引物，该引物包含Illumina兼容的linker序列。第一条cDNA链合成之后除去RNA，在随机引物和DNA聚合酶的作用下生成cDNA的第二条链。随机引物中也包含Illumina兼容的linker序列。在第一条链和第二条链合成的过程中无需纯化，插入的片段适合短读长（SR50，PE50，SR100，PE100）。cDNA生成之后进行磁珠纯化。最后，文库扩增以供簇生成所需。该试剂盒中包含96个外部标签，可以做到多重。文库可以兼容单端和双端测序试剂盒。