9°N DNA 连接酶

产品及特点

9o N DNA连接酶能够催化磷酸二酯键的形成，使与同一互补靶 DNA 链杂交的两条相邻寡核苷酸链的 5 -磷酸末端和 3 -羟基末端通过磷酸二酯键相连。该酶在 45℃-90 ℃ 范围内均有活性。具体有下列特点：

1. 可在高温条件下，连接 DNA 链上的切刻位点

2. 具有极高的耐热性，与 PCR 反应条件兼容

3. 可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测

4. 通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变

反应条件

1 X 9 oN DNA 连接酶反应缓冲液 [10 mM Tris-HCl，600 μM ATP，2.5 mMMgCl2，2.5 mM DTT， 0.1% Triton X -100 (pH 7.5 @ 25℃) ]。1X 9oN DNA连接酶反应缓冲液中，底物 DNA 和酶于 45℃ 温育 15 分钟，或者设定合适的反应条件使用热循环仪进行反应。连接反应通过加入含 50%甘油，50 mM EDTA 和溴酚蓝的混合物来终止。

单位定义(粘性末端活性单位)

1 单位指 50 ul 反应体系中，45℃ 条件下，15 分钟能使 50% 的 1 ug BstEII消化的 λ DNA 片段（12 bp 粘性末端）发生连接所需要的酶量。粘性末端活性单位相当于切口封闭单位。

Buffer 成分

10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，200 μg/mlBSA，50% Glycerol，10 mM ammonium sulfate

注意事项

9oN DNA 连接酶不能代替 T4 DNA 连接酶使用。该酶可以有效连接 12 bp 的互补片段，但却无法连接 4 bp 的互补片段（典型限制酶消化产物）。

参考文献

(1) Thermococcus sp. （strain 9°N-7）isolated by Dr. Holger Jannasch,

Woods Hole Oceanographic Institute, 1991.

(2) Barany, F. （1991） Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 189–193.

(3) Takahashi, M. et al.（1984） J. Biol. Chem., 259, 10041–10047.

(4) Barany, F. （1991） The Ligase Chain Reaction in a PCR World （pp.5–16）. Cold Spring Harbo-r: Cold Spring Harbor Laboratory Press.

(5) Michael, S.F. （1994） Biotechniques, 16, 411–412.