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NEBuilder® 高保真 DNA 组装预混液

NEBuilder® 高保真 DNA 组装预混液

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产品名称： NEBuilder® 高保真 DNA 组装预混液

英文名称： NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix

产品编号： E2621

产品价格： null

产品产地： 美国

品牌商标： null

更新时间： 2024-02-05T10:26:12

使用范围： null

北京百灵克生物科技有限责任公司
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NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液可以高效、准确地组装 DNA 片段。不管片段的长短和末端匹配性如何，该方法都可以无缝组装多个 DNA 片段。还可以组装单链寡核苷酸或含 15-30 bp 重叠区的不同片段长度的 DNA 片段。此方法操作简单、灵活，以预混液形式提供，主要用于合成生物学和多片段的一步克隆。在同一反应缓冲液中有几种不同的酶活性（见图 1）：
  • 核酸外切酶活性会产生单链 3´ 突出末端，促使互补的末端重复序列（重叠区）退火
  • 聚合酶活性会填补退火片段的缺口
  • DNA 连接酶活性能在组装后的 DNA 切刻处进行连接
最终形成双链闭合的 DNA 分子，可作为 PCR、RCA 的模板或其它分子生物学应用，包括直接转化大肠杆菌。

NEBuilder 高保真 DNA 组装试剂盒提供多种剂型：含 NEB 5-alpha 化学感受态细胞（克隆试剂盒，NEB #E5520），含 NEB 10-beta 化学感受态细胞（大片段组装试剂盒，NEB #E2623）；以及不含感受态细胞（预混液，NEB #E2621）。NEB 5-alpha 化学感受态细胞适用于小于等于 15 kb 片段的常规组装。 对于大于 15 kb 组装片段的转化，NEB 建议使用 NEB 10-beta E. coli 感受态细胞（高效级，NEB #C3019）或 NEB 10-beta E. coli 电转感受态细胞（NEB #C3020）。如果组装基因包含重复序列，应使用 NEB Stable E. coli 感受态细胞（NEB #C3040）。

NEBuilder 的应用：
为帮助您选择最佳 DNA 组装方法，请参考合成生物学/DNA 组装选择指南。

如需帮助设计用于 NEBuilder 的引物，请观看引物设计视频。

图 1：不同于一般的 DNA 组装试剂


图 2：NEBuilder 高保真 DNA 组装方法概述


图 3：NEBuilder 高保真 DNA 组装提高了 4 个片段组装反应的效率


使用 NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液（NEB #E2621）、GeneArt® Gibson 组装®混合液（Thermo Fisher #A46627）和 In-Fusion® Snap 组装预混液（Takara Bio USA #638947），组装具有 20 bp 重叠的四个片段（约 20 fmol），构建 pUC19 载体。在 50℃ 下进行组装反应，反应时间为 60 分钟或 15 分钟。将 2 μl 的每种组装后的混合物转化到 NEB 5-alpha E.coli 感受态细胞（NEB #C2987）中，并涂布到含 IPTG 和 X-Gal 的 LB/Amp 平板上。统计代表正确组装的蓝色菌落数（> 总菌落的 95%）。NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液得到的菌落数多于两种竞品。

查看与 GeneArt Gibson 组装预混液和 In-Fusion Snap 组装预混液对比的其它性能数据
产品类别:
 
DNA Assembly, Cloning and Mutagenesis Kits Products
应用: 
NEBuilder® HiFi DNA Assembly, 
High-throughput cloning and automation solutions, 
Genome Editing Applications
收起
  • 试剂盒组成

    试剂盒组成

    本产品提供以下试剂或组分：

    NEB # 名称 组分货号 储存温度 数量 浓度
    • E2621S     -20    
        NEBuilder® Positive Control N2611AVIAL -20 1 x 0.05 ml 不适用
        NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix M5520AVIAL -80 1 x 0.1 ml 2 X
    • E2621L     -20    
        NEBuilder® Positive Control N2611AVIAL -20 1 x 0.05 ml 不适用
        NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix M5520AAVIAL -80 1 x 0.5 ml 2 X
    • E2621X     -20    
        NEBuilder® Positive Control N2611AVIAL -20 5 x 0.05 ml 不适用
        NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix M5520AAVIAL -80 5 x 0.5 ml 2 X