提供siRNA质粒载体构建技术服务
产品名称： 提供siRNA质粒载体构建技术服务
英文名称： siRNA 质粒载体构建技术服务
产品编号：
产品价格： 1500
产品产地： null
品牌商标： null
更新时间： null
使用范围： null
上海分的生物科技有限公司
- 联系人 :
- 地址 : 上海市杨浦区
- 邮编 :
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 136****9330
- 传真 : 13661449330
- 邮箱 : 2293446234@qq.com
siRNA载体构建服务程序：
1. siRNA表达载体的选用：
本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因，可以无限扩增。
2. 设计siRNA靶序列
A 、根据目的mRNA序列，设计3条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19 － 21nt 长。
B 、对于每条选定的siRNA 靶序列，设计 siRNA 正义链和反义链，以 loop(9nt) 相连，称为 shRNA（short hairpin RNA）。
C、阴性对照的设立.
3. 合成模板：
合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链，退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点，同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点，可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。
4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后，1 ％琼脂糖凝胶电泳，回收线性载体。
5. 连接与转化：
把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶，插入片断与载体的摩尔比约为 3 ： 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌，在LB Amp培养基上涂板，37 ℃培养过夜。
6. PCR 鉴定
7. 测序鉴定
8.柱抽提阳性克隆载体并定量。
报告内容及标准
1、含目的片段的质粒、含该质粒的细菌各一份；
2、引物序列、载体图谱、测序结果各一份；
3、载体构建技术服务所需试剂耗材、仪器设备、操作过程一份。
客户须知
1、客户提供载体构建及改造所需的实验方案，目的基因产物及序列（如果目的基因不好制备），载体（如果本公司载体库里没有）及相关背景资料。
2、若客户只提供组织、细胞等样本，还需提供目的基因NCBI登录号，本实验室将额外收取RNA提取及逆转录费用。
3、对于表达载体、报告基因载体以及病毒载体等的构建，您需要提供序列资料、希望克隆到的载体、酶切位点等资料；
4、对于本实验室已有的载体和模版，免费提供。
本实验室还对外开放提供流式细胞检测，荧光定量PCR，半定量RT-PCR，Western Blot，ChIP，免疫组化，高效液相蛋白芯片，靶基因预测，细胞培养，PCR产物纯化及形态学（石蜡切片，冰冻切片，免疫荧光，HE染色，拍照，细胞爬片等）。有需要的同学请联系13661449330，宋老师，QQ2293446234，邮箱：songjing1214@sina.cn