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串联亲和纯化(TAP)-质谱鉴定

串联亲和纯化(TAP)-质谱鉴定

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产品名称: 串联亲和纯化(TAP)-质谱鉴定

英文名称: TAP-MS

产品编号:

产品价格: 1999元

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上海爱翱生物科技有限公司
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串联亲和纯化(tandem affinity purification, TAP)技术基本原理包括:重组构建带有两种亲和纯化标签的融合靶蛋白,然后转染到宿主细胞或组织,带标签的靶蛋白表达并结合上相关蛋白质后,利用标签与相应磁珠作用,两步纯化得到相关蛋白质。
 
TAP技术的主要优点:①可以在细胞生理状态下或者接近生理状态表达融合靶蛋白,研究靶蛋白及其未知的相关蛋白复合体,更真实地反映蛋白质在生物体内的功能;②经过两次洗脱,降低了非特异蛋白量,相比较于酵母双杂交更敏感,更少假阳性.TAP技术属于蛋白质组学中“Bottom-up”策略之一,对研究蛋白质功能有很强的实用性。TAP技术联合质谱对纯化后的蛋白质进行分析,通过生物信息学获得的蛋白相关性可信度高,为后续的验证工作节省大量时间。TAP联用质谱,以检测在细胞内与FGF1分子相互作用的蛋白质为例,实验过程如下:
 
 

质谱鉴定实验流程(胶内酶解或溶液内酶解)
1:胶内酶解

2:溶液内酶解
  
 
使用仪器
Thermo Scientific Q Exactive 
(高分辨质谱)


技术优势
适合中度复杂的蛋白质样品, 如相互作用的蛋白质条带和洗脱液; 高准确性, 高灵敏度。
实验报告内容
1、相互作用蛋白质谱鉴定结果(excel 列表);
2、完整的实验步骤、使用仪器、试剂来源、软件检索参数等。
 
样品要求

样品 样品要求
SDS-PAGE条带 考染,条带清晰可见
蛋白质溶液 蛋白质总量>5μg,浓度>1μg/μl;
说明裂解液和洗脱液成分,浓度信息
 

                                 
实验样本预处理及运输注意事项
为保证高质量的技术服务结果,请您参照以下说明对实验样本进行处理和保存:
⊙蛋白洗脱液:定量并计算总蛋白量,真空干燥后,密封好管口,冰袋包装寄送。
⊙蛋白质条带(考染):从凝胶上割取条带时,避免污染,将条带放入EP管内,密封好管口,冰袋包装寄送。
特别提醒:快递寄送样本运输过程中,可能晃动幅度会比较大,请做好基本运输防护措施。
注:在寄送样本时,请填写好样本登记表,随样本一同寄往本公司。