Bsu DNA 聚合酶，大片段

产品及特点

Bsu DNA 聚合酶大片段保留了 Bacillus subtilis DNA 聚合酶 I 的 5 →3 聚合酶活性，但是缺失了 5 →3 外切酶结构域。大片段缺乏 3 →5 外切酶活性。

具体有下列特点：

1. 提高了修饰核苷酸的掺入能力

2. 随机引物法标记

3. 合成 cDNA 第二链加单个 dA 尾

4. 链置换的 DNA 合成

反应缓冲液

1X Buffer [10 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT(pH 7.9 @ 25℃) ]。加入 33 μM dNTPs (不随酶提供) 。

单位定义

1 单位指 37 ℃ 条件下，30 分钟内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

热失活

75 ℃ 20 分钟。

注意事项

由于缺乏 3 →5 外切酶活性，Bsu DNA 聚合酶大片段不能切除 3 未配对的突出末端，因而不适用于生成平滑末端。25℃ 时 Bsu DNA 聚合酶大片段保留 50%的活性，是同温度下 Klenow 片段 (3 →5 exo-) 的两倍。

参考文献

(1) Okazaki, T. et al. (1964) J. Biol. Chem. 239, 259–268.

(2) Piepenburg, O. et al. (2006) PLOS Biology, 4, 1115–1121.