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原位杂交

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产品名称: 原位杂交

英文名称: in-situ hybridization

产品编号: 004

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河北博海生物工程开发有限公司
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原位杂交实验步骤
(以地高辛标记HPV DNA探针为例)
· 4-6mm切片,用处理过的玻片捞片。
· 56-60℃烤片,2-16小时。
· 新鲜二甲苯脱蜡,10分钟×2次。
· 100%乙醇5分钟×2次,空气干燥。
· 加入50ml胃酶工作液,37℃消化30分钟。
· 弃去胃酶工作液,逐级酒精脱水1分钟×3次,空气干燥。
· 加10-20ml探针,加盖玻片。用橡胶水泥将盖片周围密封(目录编号ZLI-9601)。
· 变性95℃ 5-7分钟。
· 杂交37℃ 2-16小时。
· 揭去橡胶水泥,将切片插入PBS/TBS缓冲液中以便去掉盖玻片,约5-10分钟。
· 每张切片加入2-3滴杂交后洗液,37℃孵育15分钟。
· PBS/TBS缓冲液洗,1分钟×3次。
· 每张切片加入适量辣根酶标记抗地高辛抗体,37℃孵育30分钟。
· PBS/TBS缓冲液洗,1分钟×3次。
· 滴加适量DAB工作液,镜下观察显色结果,约3-10分钟。
· 弃去显色液,蒸馏水或自来水冲洗。
· 选择:每张切片加入1滴复染剂,5-10秒钟。
· 蒸馏水或自来水冲洗。
· 脱水、透明、封片。
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