CytoTell 活细胞染色Violet 500是美国AAT Bioquest生产的活细胞染色探针，流式细胞术结合荧光染色是分析异种细胞群体的有力工具。在所有现有的荧光染料中，CFSE是广泛用于活细胞分析的细胞增殖指标。但是，由于CFSE及其荧光素类似物的激发和发射光谱几乎与GFP或FITC相同，因此不可能将CFSE及其荧光素类似物用于GFP转染的细胞或使用FITC标记抗体的应用中。 CytoTell 染料在主要的激光线（例如405 nm，488 nm或633 nm）上受到多色发射的良好激发。 CytoTell 染料具有小的细胞毒性，可用于GFP细胞系或FITC标记抗体的多色应用，因为它们的激发或发射光谱不同于荧光素。 CytoTell Violet 500是一种紫色的可激发激光的绿色荧光染料，可均匀染色细胞。随着细胞分裂，染料在子细胞之间平均分配，可以通过将染料的荧光强度连续减半来测量。使用标准的含甲醛固定剂和基于皂苷的通透缓冲液，可以固定和透化CytoTell Violet 500标记的细胞，以分析细胞内靶标。 CytoTell Violet 500的峰值激发为405 nm，可以被紫色（405 nm）激光线激发。它具有500 nm的峰值发射，可以用500/20带通滤光片（相当于BDHorizo​​n®V500）检测到，使其与使用GFP或FITC抗体进行多色细胞分析的应用兼容。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的CytoTell 活细胞染色Violet 500。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物准备细胞

2.加入1X染料工作液

3.在室温或37^oC下将染料与细胞一起孵育10至30分钟

4.去除染料工作液

5.使用流式细胞仪和适当的滤波片进行分析

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。

CytoTell 染料储备液（500X）：
将500 μL DMSO加入到染料粉瓶中，通过涡旋使其充分混合，得到储备液（500X）。注意：储备溶液应及时使用；应将所有剩余的溶液等分并在<-20 ^o C下冷冻。避免重复冻融循环，并避光。

2.工作溶液配制

CytoTell 染料工作溶液（1X）：
在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的pH 7缓冲液中以1至500稀释500X DMSO储备溶液（例如1到500的DMX储备溶液稀释到500 μL缓冲液）。涡旋混合均匀。注意：对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定染料工作溶液的最终浓度。建议以至少十倍以上的浓度进行测试。例如，CytoTell Red在某些细胞类型中使用的量可能要比建议的浓度少得多。

样品示例及操作

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。

2.离?细胞以获得每管1-5×10^5_个细胞。

3.在500 μL CytoTell 染料工作溶液中重悬细胞。可选：可以将500X DMSO储备溶液直接添加到细胞中而无需去除培养基（例如，将500 μL DMSO储备溶液添加到500 μL细胞中）

4.在室温或37°C下，将细胞与染料溶液孵育10至30分钟，避光。

5.从细胞中除去染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500 μL预热的HHBS或培养基中，每管可得到1-5×10 ^5个细胞。

6.用流式细胞仪或荧光显微镜监测在Ex / Em（参见表1）下的荧光变化。