产品信息
    
 
    

    

        

            

                

                
产品名称
                
                

                
产品编号
                
                

                
规格
                
                

                
价格（元）
                
            
            

                

                
Lymphocyte separation medium1.084 淋巴细胞分离液1.084
                
                

                
40504ES60
                
                

                
100 mL
                
                

                
546.00
                
            
        
    
    
    
 
    
产品描述
    
 
    
淋巴细胞分离液（Lymphocyte Separation Medium 1.084，简称LSM-1.084）是一种无菌的即用型分离液，基于Böyum的Ficoll-甲泛影钠溶液做过一些改良，使得操作简单快速且分离效率更高。本品是无菌的聚蔗糖Ficoll/泛影酸钠混合溶液，密度为1.084 g/ml，内毒素含量很低（＜0.12 EU/mL），是在严格控制的环境下加工生产的，生产条件符合ISO13485:2003标准和GMP认证。相对于密度为1.077 g/mL的人淋巴细胞分离液，本品适用于分离更高密度的人单个核细胞，包括外周血，脐带血以及骨髓瘤来源的组织样本。还适用于分离大小鼠血细胞，正因为啮齿动物的淋巴细胞密度稍高于人淋巴细胞。
    
 
    
工作原理
    
 
    
去纤维蛋白或抗凝人血以1：1的比例用无菌生理盐水或平衡盐溶液稀释，小心的添加在分离液上层（不要混杂在一起），之后离心30-40 min。离心过程中，差速迁移使其最终形成几个不同的细胞分层：
    
① 聚集在管底的颗粒主要是Ficoll 聚集的红细胞以及沉淀物；
    
② 紧挨着上面一层的颗粒主要是粒细胞，其处于LSM-1.084溶液的渗透压临界，具有足够高的密度迁移穿过LSM-1.084溶液层。
    
③ 单个核细胞分布在血浆和LSM-1.084分离液的中间层，还包括一些沉降系数低（密度低）的颗粒，如血小板。
    
淋巴细胞，单核细胞和血小板不具有足够高的密度穿透LSM-1.084分离液层，因此这些细胞在血浆和LSM-1.084分离液层聚集形成一个中间分层。吸取中间层，用平衡盐溶液短暂洗涤，以除去血小板，细胞分离介质和血浆，就可以分离单个核细胞。通常情况下，分离所得的细胞中95±5%为单个核细胞，细胞存活率＞90%，回收率为60±20%。
    
 
    
运输与保存方法
    
 
    
室温运输。
    
4-30 °C密闭避光环境下可稳定保存3年，开瓶后需4-8 °C保存。
    
 
    
影响单个核细胞分离效果的因素
    
 
    
1. 血液样品保存时间
    
血液尽可能新鲜且无血块，为获得最佳分离效果，最好在取血2h内进行实验。血液放置过久可能会降低细胞存活率、回收率，甚至有可能引入粒细胞和红细胞污染，放置超过6h可能会严重影响分离效果。
    
2. 血液体积
    
血液量和管径决定样本在管子中的高度，以及后续的离心时间。提高离心管内的血液高度会引入红细胞污染的可能。但是分离效率不会明显受管径的影响。因此，对于体积大的血样，建议可在保持离心时间不变的情况下选择更大直径的离心管。
    
3. 红细胞去除
    
单个核细胞分离的产量和纯度与红细胞是否去除干净有关。
    
若全血中红细胞发生凝集会导致一些单个核细胞也被聚集在内，从而在离心后被沉降在红细胞层内。可通过稀释全血的方法来避免此现象。温度大小会影响红细胞的凝集，18℃条件能提供最佳的分离效果。若温度升高（如37℃）会提高红细胞凝集的可能，降低分离效果。低温（4℃）环境红细胞聚集可能降低，需要增加离心时间。提高离心时间到5-10 min能减低红细胞污染。
    
4. 血小板污染
    
对于血小板要求较为严格的分离实验，使用4-20%的蔗糖梯度层加在LSM-1.084溶液层上方，再次离心以去除所有的血小板。离心后，血小板分布在蔗糖溶液上方，单个核细胞穿过蔗糖溶液停留在LSM-1.084溶液上方。
    
 
    
操作方法
    
 
    
1. 材料准备
    
1）样本体积（4 mL总体积）：取2 mL的去纤维蛋白或抗凝血，将其与等体积（2 mL）的无菌盐溶液以1：1比例混合。注：大体积的血样可以得到相同的分离效率，只需要选用更大直径的离心管，以维持血样的高度（约3 cm）和LSM-1.084溶液的高度（约2.4 cm）。
    
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