双荧光素酶活性检测试剂盒

产品及特点

由于检测光量子的方法非常敏感，采用生物发光（bioluminescent）法 ，是报告基因检测最常用的有效手段。荧光素酶（luciferase）催化底物荧光素（luciferin）的转化，发射出光子。萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）和海肾荧光素酶（Ranilla luciferase）催化的发光反应，具有相似的光学特征和很好的浓度线性范围（7~8个数量级的线性范围），酶的检测灵敏度达10-18~10-20 mol，但两者催化的化学反应底物和最适反应条件完全不同。利用这一特性，将这两种荧光素酶配合，即可形成十分有效的双荧光素酶报告基因系统，其中Ranilla luciferase通常作为内参照。其原理如下：

本试剂盒提供了一体化形式的双荧光素酶检测系统。采用通用裂解缓冲液，适合于两种荧光素酶活性的保持，且与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容。优化的两种酶反应体系，使每种发光反应持续数十分钟，以便于手工操作多个样品，并保证Firefly luciferase发光及时淬灭，不影响后续Ranilla luciferase的测定。优的反应体系还使两种荧光素酶活性比值趋于合理的敏感范围，更有利于后续数据的比较。该产品特点如下：

1. 准确性高：使用海肾荧光素酶作为内参照，减少了细胞数目、细胞健康状态、转染效率和非特异性细胞反应等因素的影响，使主报告基因的结果归一化

2. 高度灵敏：对两种荧光素酶的检测灵敏度达10-18~10-20 mol

3. 线性范围宽：线性范围达到7~8个数量级

4. 快速简便：一体化两步法检测，特别适合于高通量筛选

使用及效果

收取转染细胞，1x通用裂解液裂解。按一定比例混合，配制两种发光检测液。同一个样品中先后加入两种发光检测液，测定两种酶催化的发光单位RLU。（不同容器细胞所需1xULB的体积和配制发光检测液比例详见产品使用手册）