T4 RNA连接酶

产品及特点

本酶催化ATP降解为AMP和焦磷酸的反应，释放的能量能使寡核苷酸的5’-P末端和3’-OH末端结合，也能催化分子内连接的环化反应以及分子间的连接反应。最小底物为NpNpNOH（3’-OH Oligomer、受体）、pNp（5’、3’-DPmonomer、供体）。连接效率受供体和受体各自的碱基影响很大。与RNA相比DNA连接的效率较低。本产品主要用途：

1. 单链RNA及单链DNA的3’-OH末端的标记。

2. 单链Oligo RNA及单链Oligo DNA的合成。

3. 合成全长cDNA。

活性单位定义

以Oligo (A)n为底物，在5℃、10分钟内使1 pmol［5’–32P］pCp 掺入酸不溶

性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

纯度

1. 100 U的本酶和1 μg的λ-Hin d III片段在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

2. 100 U的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

3. 20 U的本酶和6 μg的λ-Hind III片段或6 μg λ-Pst I片段在37℃下反应16小时，通过T4 DNA Ligase可将90%以上的DNA进行连接，同时，所连接的DNA可通过Hind III或Pst I 100%地再切断。

4. SDS-PAGE: ＞90%。

Buffer成分

储存Buffer:Tris-HCl（pH7.5） 20 mM，NaCl 50 mM，DTT 1 mM，EDTA0.1 mM，Glycerol 50 % 。反应Buffer，10×：Tris-HCl（pH7.5）500 mM，MgCl2 100 mM，DTT 100 mM，ATP 10 mM。

备注

1. 连接反应的最适反应温度为5～15℃，若超过该温度活性会被抑制。

2. PEG共存的条件下能够促进反应，且反应特异性不变。为了提高连接反应效率，建议使用酶浓度高而ATP浓度尽量低的反应条件。

3. 在10×反应缓冲液中如果直接加入0.1%的BSA会产生大量白色沉淀，因此在配制反应液时，请按下面顺序添加试剂：dH2O→10×Buffer→0.1% BSA→底物RNA or DNA。

4. BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。