实时荧光定量PCR（ Real time PCR ）技术服务 

                                
                                                                                                                             — 华夏远洋明星产品

第一部分、背景知识

实时荧光定量PCR（Real-time PCR）即通过荧光染料或荧光标记的特异性探针对PCR反应过程进行实时监测，根据PCR指数扩增期间荧光信号的变化来即时测定对应特异产物的含量，并据此推断目的基因的初始量。该方法可以检测细胞、组织或微生物中基因表达变化，比较不同组织的mRNA表达差异。如不同药物浓度处理后相关基因表达水平高低变化；验证基因芯片结果；siRNA干扰的实验结果等。与常规PCR（RT-PCR）相比，实时荧光定量PCR具有极高的灵敏度、高度的重复性和极佳的特异性。因为PCR扩增过程闭盖操作，避免了反应产物的污染，大大提高了结果的可靠性，现已成为现阶段国际公认的核酸分子定量检测的金标准，在基因表达研究和临床疾病检测等领域已得到广泛应用。

第二部分、为何称之为明星产品？

星级服务：

• 实验设备：所用荧光定量PCR仪为伯乐（BIO-RAD）公司仪器；
• 试剂耗材配备：所用试剂为SYBR Green I 的升级替代产品Eva Green，原装进口白色低腰八联排管；
• 论文发表标准：论文可发表在国外任何影响因子的刊物上；
• 参观学习：实验中，客户可以随时来参观学习询问；
• 实验要求：根据客户要求每个反应免费重复2-3次。样本在60个以上，基因3个或以上（含内参），RNA提取和反转录项目免费。

 
第三部分、技术流程

• RNA的提取；
• DNase I 消化RNA中残留的DNA；
• 琼脂糖凝胶电泳，判断RNA的质量；
• RNA反转录为cDNA；
• 引物设计、合成、验证，反应体系和反应条件优化；
• 上机检测：包括扩增曲线、溶解曲线；
• 数据整理、表达量计算、作图；
• 实验报告的书写，包括详细的仪器、耗材、试剂、引物信息、反应体系、实验条件、实验图片、实验数据及结果分析。

第四部分、送样要求

细胞（≥10⁶）、组织（≥100mg）、血液（≥1ml）、叶片（≥100mg）等样品材料，基因组DNA或总RNA（体积≥20μl，浓度≥50 ng/μl）。外地客户可以干冰邮寄，北京客户直接联系公司专员取样。

 
第五部分、背景资料

客户提供物种信息、GeneBank号、目的基因名称或特异基因的序列。

 
第六部分、提供结果

实验所用所有仪器试剂及耗材、引物序列；RNA电泳图和PCR特异性电泳图；详细的实验过程；原始数据（包括扩增曲线和熔解曲线）及数据分析结果。

 
第七部分、服务内容、报价、周期