蛋白定量技术服务
产品名称： 蛋白定量技术服务
英文名称： Protein quantification
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蛋白定量
收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。
常用的蛋白定量方法有：
● Bradford法: |
检测原理: Bradford与蛋白质四级结构,特殊氨基酸结合,由棕色变成蓝色,595nm检测.该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不使用于小分子碱性多肽的定量,如核糖核酸酶或溶菌酶,去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果,如TritonX-100,SDS,NP-40等。
● Lowry法:
检测原理: 是Cu2+与蛋白作用生成的Cu+与双缩脲试剂形成兰色络合物,菲林试剂增强兰色形成,750nm检测.
● 紫外分光光度法:
检测原理:是因蛋白质样品在280nm波长下有最大吸光率,最大吸光率主要取决于酪氨酸和色氨酸的存在.
三种蛋白定量方法的比较：
方法
灵敏度
时间
原理
干扰物质
说明
紫外吸收法
较为灵敏
50～100μg 快速
5～10分钟 蛋白质中的酪氨酸和
色氨酸残基在280nm处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶各种核苷酸
用于层析柱流出液的检测；
核酸的吸收可以校正
Folin－酚试剂法
（Lowry法） 灵敏度高
1～5μg 慢速
40～60分钟 双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂
被Tyr和Phe还原 硫酸铵Tris缓冲液甘氨酸各种硫醇
耗费时间长；操作要严格计时颜
色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法
(Bradford法) 灵敏度最高
1～5μg 快速
5～15分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其
最大吸光值由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；TritonX-100;SDS
最好的方法
干扰物质少；颜色稳定，颜色深浅随不同蛋白质变化