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腺病毒包装表达/稳定细胞株筛选服务

腺病毒包装表达/稳定细胞株筛选服务

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产品名称: 腺病毒包装表达/稳定细胞株筛选服务

英文名称: virus package

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更新时间: 2023-09-21T16:14:01

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汉恒生物科技(上海)有限公司
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腺病毒包装

主标签

 

 

 

产品简介

 

         腺病毒是一种没有包膜的颗粒,其中的DNA以线性双链的形式存在。由于其具有宿主范围广、可感染分裂和非分裂细胞、高滴度制备、外源基因装载容量大等优点,已被广泛地应用于基础研究和临床试验中,并且腺病毒载体已成为世界上最常用的基因治疗载体之一。

 

        汉恒生物采用的AdMax^TM重组腺病毒系统是将携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒基因组的包装质粒共转染包装细胞,借助Cre/loxP系统的作用重组产生腺病毒。该系统既克服了传统共转染系统重组效率低的缺点,也避免了细菌重组中的种种不确定性,实现了快速高效的腺病毒包装。

        汉恒生物提供的重组腺病毒为复制缺陷型病毒,即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞,也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒,安全性能良好。

 

  

技术特点

 

1、复制缺陷型腺病毒颗粒,对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用;

2、无需任何转染试剂,操作简单;

3、实验简便,时间短;

4、适用于在难以转染的细胞中进行RNA干扰、过表达特定基因或过表达特定microRNA研究和In vivo 实验;

5、不适用于感染腺病毒以后细胞发生死亡和分化的敏感细胞和需要长期稳定表达目的基因的实验。

 

 

服务流程 

 


 

A、腺病毒穿梭载体的构建:

       根据不同的研究需求构建腺病毒穿梭载体,如用于RNAi的腺病毒载体、用于基因过表达的腺病毒载体、用于启动子活性研究的腺病毒载体等;


B、 腺病毒包装过程:

       将腺病毒穿梭质粒及其辅助包装质粒共转染至包装细胞中,通过Cre/loxP系统的作用实现重组,产生重组腺病毒颗粒。

 

提供产品

 

 

 

技术服务详细描述

 

 简介   

 

建立稳定的细胞系,是对靶细胞进行筛选,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物,最常用的真核表达基因载体的标志物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin),常用puro、G418进行选择性筛选。筛选得到的细胞可稳定表达目的蛋白,可以用于蛋白的扩增和富集,或者得到稳定沉默特定基因的细胞株。传统的方法是直接转染DNA质粒后,进行药物筛选,该方法费时费力,假阳性高。目前汉恒生物公司已经淘汰了传统的直接转染DNA质粒筛选稳定株的方法,利用慢病毒可以整合到细胞基因组的特性,采用效率更高的慢病毒感染的筛选方法。

 

 

实验流程

 

首先构建带有抗性标志的慢病毒载体,包装慢病毒颗粒。同时使用相应的药物,并对所需筛选的细胞进行药物浓度测试,选择细胞全部凋亡时药物的最低浓度。感染病毒后,在该浓度条件下进行筛选。10-14天后,挑取单克隆,扩增后通过RT-PCR检测mRNA表达情况或客户提供靶基因特异性抗体,汉恒生物提供Western Blot检测,根据蛋白表达情况,进一步筛选出稳定细胞株。

 

 

服务介绍

 

汉恒生物目前已经构建近300多种稳定细胞株,包括带有不同荧光蛋白:GFP,RFP,LUC等等。针对具有荧光标记而没有抗性标记的慢病毒载体,汉恒生物可以采用慢病毒感染,使用流式细胞仪分选的方式富集感染阳性的细胞。

   

汉恒生物有着多年构建稳定细胞株的经验,已在RAW264.7、U87-MG、CHG-5、HUH7、H1299、THP-1、MCF7/ADR、A549、V79、MC3T3-E1、CHO、SiHa、3D4/2、HL7702、SW480、HepG2、SGC-7901、MGC-803、HT-29、Saos-2、U-2os、PC12、SK-BR-3、MCF-7、HMSC-ad 、GIST-T1、HEK293、293T等多个种属细胞中成功构建过表达和RNAi稳转细胞株。

 

 

汉恒生物实例

 

 

 U87-MG

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

CHG-5(RNAi)

 

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