MCF7-LUC-RFP-PURO细胞
细胞操作详细步骤

                           --悬浮细胞

1.细胞复苏

1.1准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支15ml离心管，离心管中加入4-5ml细胞完全培养基。

1.2取出细胞冻存管，在37度水浴中快速解冻，将管子擦干消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.3将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000转离心5分钟。

1.4倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

1.5将重悬好的细胞转移到T25细胞培养瓶，补充培养基到5ml左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。

2.细胞传代

第一种方法：

2.1细胞密度达到2×10⁶细胞/ml时，1000转离心5分钟收集细胞，弃上清，加入新鲜培养基，使细胞密度在1-3×10⁵细胞/ml.

第二种方法：

2.2细胞密度达到2×10⁶细胞/ml时，将培养瓶中的细胞悬液分装到新的培养瓶，并补充新鲜培养基，使细胞密度在1-3×10⁵细胞/ml.

3.细胞冻存

将培养瓶中的细胞悬液转移到离心管中，1000转离心5分钟收集细胞，弃上清，加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度1-2×10⁶细胞/ml。将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。

注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
5.客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以及时联系我司：，我们随时给予解答。
细胞售后规定：
1.所有细胞免费售后期为一周,一周内细胞培养出现异常及时拍照反馈超出一周没有任何反馈视为细胞培养正常,后期若出现培养问题不再免费重发.
2.申请售后时请提供细胞收货时及反馈售后当天细胞清晰照片及培养信息，若无清晰照片及相应信息,不予免费售后;若文件较多不方便在线联系或传送，可以向销售索要细胞情况表填写后反馈给销售.
3.售后仅针对由于细胞自身状态问题导致不可传代的情况,若客户收货-周内已经传代或转移细胞多次, 出现死亡或者污染时不予免费售后;若客户在我方未允许的情况下擅自遗弃细胞，视为客户自身问题导致细胞异常,不予免费售后.
4.细胞在不同实验室培养由于所使用培养基及血清品牌个人操作习惯培养瓶品牌等诸多培养条件不尽相同，导致细胞培养形态长速度贴壁情况均可能有所差异，对于此类细胞适应环境生长的行为，不予过度解释或免费售后.
5.冻存细胞发货2管,客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支若客户未反馈并复苏2管失败我方将不提供免费售后服务.冻存细胞售 后均发复苏培养的,若要重发冻存细胞,需补加干冰运输费用.
6.客户自行冻存细胞一定要注意冻存后复苏一 管检查冻存活性,避免冻存死亡导致绝种,我方不对客户冻存细胞死亡 负责客户冻存细胞死亡时不予免费售后.
7.细胞收货后,请收集发货培养基培养至少-瓶细胞,用于确定细胞培养条件及 实验操作是否合适.
本产品仅供科研使用.请勿用于医药,不能用于临床治疗诊断使用！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。