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急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠模型

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠模型

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产品名称: 急性呼吸窘迫综合征(ARDS)小鼠模型

英文名称: Mouse Model for Acute Respiratory Distress Syndrome (ARDS)

产品编号: DSI626Mu01

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武汉云克隆诊断试剂研究所
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来源
LPS致呼吸窘迫综合征
模式动物品系
SPF级C57bl/6小鼠,雄性,周龄为8w-10w,体重为30g-35g。
实验分组
实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期
1 week
建模方法
模型建立:经腹腔麻醉小鼠,采用暴露式气管切开滴注的方法,经气管向肺内滴注LPS(给药剂量6mg/kg)而后将小鼠直立,垂直旋转小鼠,使药物在肺内均匀分布,从而建立内毒素性急性肺损伤小鼠模型。或者LPS经尾静脉或者腹腔给药,从而建立全身性炎性反应导致的ARDS模型。
在气道滴注LPS 6小时、12小时、24小时及48小时后,各取3只小鼠处死并收集支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。
样本收集:
支气管肺泡灌洗液(BALF)抽取方法:小鼠取血后,开胸,分离纵膈,注射器抽取3ml生理盐水从气管插管推入肺中,每次反复灌洗3次后抽出灌洗液,肺泡灌洗液以4℃ 3000r/min离心15min,取上清。
小鼠肺组织收集:肺组织的获取及处理:经腹腔内注射麻醉小鼠,用肝素化的生理盐水1ml经右心室心腔冲洗做抗凝处理,即刻从胸腔中取不同部分肺组织标本。
应用
疾病模型
模型评价
Diff-Quik 染色和细胞计数:
获得BALF进行Diff-Quik染色后,显微镜下观察计数计数中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞。

肺的湿/干重比:
肺的湿/干重比是反应肺水肿的直接指标,也是反应肺损伤严重程度的敏感指标。每组处死动物、剪断气管后取全肺,称湿重,然后将肺置于65℃恒温箱中干燥,24h 后取出称干重,计算肺湿/干重比值。

伊文氏蓝测定肺通透性:
在实验结束前30min静脉注射伊文氏蓝(EBD),30mg/kg,实验结束后,开胸剪开右房,冲洗肺循环,完整取出双肺,剪去气管,清洗擦干肺组织,称重后匀浆,以每100mg肺组织1ml的甲酰胺浸泡肺匀浆,37度下孵育24小时,5000r/min离心,取上清测EBD浓度。

组织病理学
肺损伤后的组织病理观察(HE染色) :
取右肺4%多聚甲醛固定,然后将肺组织常规脱水,石蜡包埋,切片(厚度为5μm),HE染色。评分方法:取6个视野进行出血及水肿评分。

标志因子水平
使用ELISA试剂盒检测肺泡灌洗液(BALF)中TNF-a、IL-6和IL-1β等细胞因子的含量。

统计学分析
应用SPSS软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x ±s)表示,采用t检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有显