服务简介

Primer Extension可以用来精确鉴定转录的起始位点；类似的方法还包括S1 mapping，5'-RACE等。相比而言，Primer Extension更直接、也更精确；但是对实验技术的要求也更高。简单来说，就是在靠近转录产物5'端的位置设计一条反向的引物（引物末端标记），然后与总RNA做杂交，并进行逆转录；最后通过测序胶电泳检测逆转录产物。为了精确定位转录起始位点（即逆转录产物的长度），还需要利用这条标记的反向引物进行Sanger法测序，并同样进行测序胶电泳来作为ladder。由于整个过程（包括样本收集、RNA抽提、引物退火杂交、逆转录等）都不能有丝毫的RNA降解，所以对其中每一步的操作要求都非常高，否则得到的结果就有可能不是一个位点（多个位点或者一片）或者是假的位点。此外，不是每个转录产物都能够鉴定出转录起始位点，比如有些转录本的丰度特别低就很可能做不出的。

吐露港目前开发出了荧光标记法结合ABI测序仪来鉴定转录起始位点的方法；希望能够为您的实验带来帮助。

服务流程

样本要求

1. 样本要以最快的速度冻存在液氮、干冰中，然后转移到-80度；干冰运输。

2. 不要用市售的RNA稳定剂保存，然后置于常温。

3. 您可以提供抽提好的RNA，我们收到后会进行质检；如果不过关，则不会进行下一步的Primer Extension实验。

4. 建议在做Primer Extension之前，先做RT-PCR以了解该转录本在该处理条件、该处理时间下的转录情况。

服务收费

说明：若目的基因的转录丰度非常低，我们通过质检会给客户反馈；若客户坚持做后续的Primer Extension实验，那么无论是否能够做出来阳性结果，我们都将收费；若客户接受我们的建议停止后续的Primer Extension实验，那么我们将仍然收取前面的RNA抽提/质检等费用。