C41(DE3) pLysS感受态细胞-克隆与表达-试剂-生物在线
C41(DE3) pLysS感受态细胞

C41(DE3) pLysS感受态细胞

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产品名称： C41(DE3) pLysS感受态细胞

英文名称： C41(DE3) pLysS

产品编号： GST-008A

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产品产地： 长沙

品牌商标： axybio

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长沙爱科博生物科技有限公司
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感受态细胞称:

C41(DE3)pLysS

菌株类型:

E.coli

货号:

GST-008A

培养基:

LB培养基

生长条件:

37 ℃,  有氧

基因型:

抗性:

氯霉素

质粒转化条件:

42 ℃热激

应用:

蛋白表达

诱导方法:

IPTG

菌株特点:

 过表达C41(DE3), C41(DE3) pLysS, C43(DE3), and C43(DE3) pLysS感受态细胞宿主菌能够有效表达来源于各个物种包括细菌，酵母，植物，病毒和动物等多个物种的有毒蛋白。

 

该系列宿主菌基因中含有突变，可以包容有毒蛋白的表达。C41(DE3)来源于BL21(DE3)。该宿主菌含有一个基因突变，能够降低T7 RNAP的酶活力，所以能够阻止过表达重组表达有毒蛋白的细胞死亡。

正如标准的BL21(DE3)菌株，过表达菌株C41(DE3), C41(DE3)pLysS, C43(DE3), 和C43(DE3)pLysS是λDE3的溶源性菌株。这些菌株在lacUV5启动子的下游含有一个T7 RNA聚合酶基因。这些宿主菌适合于表达克隆于T7启动子表达载体上的基因。过表达菌株C41(DE3), C41(DE3)pLysS, C43(DE3), 和C43(DE3)pLysS在lon和ompT蛋白酶的缺陷上是不同的。

过表达的C41(DE3)和C43(DE3)pLysS携带有一个氯霉素抗性质粒，该质粒能够表达少量的T7溶菌酶。这个酶是T7RNA聚合酶的天然抑制剂。这些宿主菌能够有效抑制T7RNA聚合酶在诱导剂诱导前的表达水平，所以能够稳定菌株去编码特定的独立蛋白。在培养细菌的过程中，应该加入34 µg/mL的氯霉素来维持pLysS质粒的存在。

 

请注意的是，该过表达系列宿主菌的蛋白表达量与BL21(DE3)相比要稍低。

使用方法:

（1）取出感受态细胞，手心融化感受态或者置于冰上5min解冻。

（2）然后将连接产物10ul加入感受态中（100ul），轻弹感受态离心管底部，混匀，冰浴30min。

（3）42℃水浴热激90S，之后再冰浴5min。

（4）取出离心管（感受态），吸水纸吸去离心管外壁水分，室温放置10min。

（5）每管中加900μl LB(或SOC)培养基(不含抗生素)，37℃振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

（6）室温4,500rpm离心5分钟，弃去900μl上清后，用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含抗性的的LB琼脂平板。

（7）将平板置于室温直至液体被吸收。

（8）倒置平皿，于37℃培养，12~16小时后可出现菌落。