大鼠脾脏淋巴细胞分离液试剂盒

说明书                                1 份

【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
1. 首先制备脾脏组织单细胞悬液，制备方法详见“脾脏组织单细胞悬液制备技术”。
2. 取一支 15ml 离心管，加入与脾脏组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液最少不得少于 3ml）。
3. 用吸管小心吸取脾脏组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min。（注：根据脾脏组织单细胞悬液量确定离心条件，脾脏组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
4. 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为稀释液层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。
5. 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，向离心管中加入10ml 清洗液混匀细胞。
6. 250g，离心 10min。
7. 弃上清。
8. 用吸管以 5ml 清洗液重悬所得细胞。
9. 250g，离心 10min。
10. 重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。
【注意事项】
1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取样 2h 内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
2. 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
3. 吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。
4. 分离液用量大于脾脏组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。

【储存条件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】
本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于 80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

红细胞 白细胞 血小板 含量（个/L）
（4.0-5.5）×1012 （4.0-10.0）×109

（1.0-3.0）×10