冰冻切片(frozen section)是一种在低温条件下使组织快速冰冻到一定硬度，然后进行切片的方法。冰冻切片30分钟出结果，可在手术过程中摘取样本送至病理科快速诊断。

仪器：冰冻包埋仪、冰冻染色机、冰冻切片机

耗材：冰冻头、冷冻包埋装置

试剂：冷冻包埋剂（OCT）、苏木素、伊红、二甲苯、75%酒精

冰冻切片流程

取材→包埋（<30s）→冷冻（1-3min）→切片（2-5min）→固定（10-15s）→染色（4-5min）→封片（<1min）

取材

新鲜组织取材不能遇水，如果组织自身带水较多，可用滤纸吸干（目的是为了防止冰晶空洞等现象在切片过程中产生）；取材的器械要保持干燥，取材时所取的范围应尽量避开出血坏死区域及脂肪区域；

所取组织块大小应合适。组织过大切片时阻力加大，难免产生刀痕及褶皱，加大了制片的难度。

包埋

包埋机一般使用OTC或普通胶水，OTC包埋剂质感细腻，对刀片损伤小，有利于切片；

包埋时将包埋剂涂抹均匀，并根据组织情况和医生的要求确定包埋方向，如管腔、皮肤、囊壁等要立埋；包埋体积较小的组织，可以先挤压少许的包埋剂形成一个平台，再放入小组织进行包埋。

冰冻温度与时间：

冰冻的温度与时间时制作冰冻切片的关键因素，需要根据组织的种类、厚度和大小来调节；

冰冻温度过低，会造成组织过硬，切片碎裂；温度过高会造成组织硬度不够，难以切片。

切片

在组织和包埋剂冷冻到发白后即可开始切片；

切片时右手摇轮转要力道均匀、柔和、缓慢，切片厚度掌握在5微米，左手持毛笔在切片形成时按住组织边缘，使其不发生卷曲

将切片展平粘贴在干净的载玻片上，应立即放入固定液中固定，如果固定不及时，会发生细胞退变，切片中细胞核模糊不清呈雾状。

冰冻切片HE染色流程

固定（95%乙醇）→苏木素→水洗→盐酸乙醇分化（0.5~1%）→水洗→温水返蓝→伊红→梯度酒精→二甲苯透明→封片

 注意事项

1、组织取材要规范：

冰冻切片的组织要尽可能新鲜，不触碰谁，取材要及时，动作要迅速。

2、取材大小要厚薄适中

在确保渠道主要病变的前提下，尽量避开钙化、坏死、脂肪等。

3、贴片

可在载玻片上滴3μl左右的PBS后贴片, 以所滴的PBS为起点轻轻沾起组织片, 该过程要防止气泡产生。