SunBio™ Trans-EZ siRNA转染试剂(品牌体验价)-RNAi技术-试剂-生物在线
SunBio™ Trans-EZ siRNA转染试剂(品牌体验价)

SunBio™ Trans-EZ siRNA转染试剂(品牌体验价)

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产品名称: SunBio™ Trans-EZ siRNA转染试剂(品牌体验价)

英文名称: SunBio™ Trans-EZ siRNA

产品编号: STR07005

产品价格: 0

产品产地: 美国

品牌商标: SunBio™

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使用范围: null

上海生博生物医药科技有限公司
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    SunBio Trans-EZ siRNA转染试剂适用于绝大多数原代培养细胞和转化细胞株的siRNA转染,以抑制内源性基因或外源性基因的表达。在最佳实验条件下,转染后细胞的存活率高达90%以上,转染效率高于其他类型的转染试剂。特点:1.转染效率高; 2.细胞毒性低;3.生物稳定性高;4.适用范围广泛;5.不受有无血清及抗生素的影响;6. 操作简单,无需更换培养基。
该转染试剂可用于下面的稳定细胞系或原代细胞,通过目的报告基因,如 EGFP,Luciferase或者内源性基因表现:
例如Hela-EGFP, A549-EGFP, C6-EGFP, B16F0-EGFP, CHO-K1-EGFP, HT1080-EGFP, HeLa-Luc, CHO-K1-Luc, HT1080-Luc, PC-3M-Luc-C6, NIH-3T3, NRK-49F,原代肝脏星状细胞等等.   

SunBio Trans-EZ siRNA转染试剂在Hela-EGFP细胞中对于报告基因EGFP的反转染过程 (Example #1)

一:细胞的准备
    将Hela-EGFP细胞种到96孔板中,使用含有10%小牛血清的DMEM培养基培养,密度为1~1.5x104个细胞/100微升/孔,过夜培养, 转染实验中细胞融合度达到80~90%。

二:试剂的准备
    SunBioTM转染试剂(5mg/ml备用液)与 siRNA (0.25mg/ml, 相当于 20mM)在Opti-MEM中分别以 2/1, 4/1, 8/1, 16/1 (w/w)的比率准备好,用于转染效率实验。

三:板的规格:转染实验于96孔板中进行(三倍孔实验).

Blank/未处理
只加siEGFP
(0.25 µg /孔)
SunBio/siEGFP (w/w):
2/ 1
SunBio/siEGFP (w/w):
4 / 1
SunBio/siEGFP (w/w):
8 / 1
SunBio/siEGFP (w/w):
16 / 1

注:siEGFP即针对EGFP的siRNA.

四:用SunBio 转染试剂制备siEGFP混合物
    在96孔板中,siEGFP的用量按0.25微克/孔计算配制混合物用于转染实验。
    siEGFP 组, siEGFP 用量为 4 ml;Opti-MEM 用量为26 ml。

表一

siEGFP (0.25 µg/µl)
Opti-MEM
SunBio转染试剂 (5 µg/µl) / siEGFP (0.25 µg/孔) 比率
2 / 1
4 / 1
8 / 1
16 / 1
SunBio
Opti
SunBio
Opti
SunBio
Opti
SunBio
Opti
1.0µl × 3
6.5µl × 3
0.1µl× 3
7.4µl × 3
0.2µl × 3
7.3µl × 3
0.4µl × 3
7.1µl × 3
0.8µl × 3
6.7µl × 3
4.0µl
(×4)
26.0µl
(×4)
0.4µl
(×4)
29.6µl
(×4)
0.8µl
(×4)
29.2µl
(×4)
1.6µl
(×4)
28.4µl
(×4)
3.2µl
(×4)
26.8µl
(×4)

注:表中所提到的比率均为重量比(w/w)
这四种比率, 总的 siEGFP 用量为 4.0ml x 4 = 16ml; 总的Opti-MEM 用量为 26.0ml x 4 = 104 ml.

五:每25ul的 siRNA 和转染试剂混合到一起,在RT中孵化15分钟,每种混合物中各取15ul 加到指定的板中。

六: SunBio 转染试剂辅助siEGFP所得的 knockdown 效率,在转染后 48小时通过荧光显微镜即可观察。(siRNA anti-luciferase 实验在 luciferase稳定的细胞系中和在 EGFP 稳定的细胞系中是相似的.)

SunBioTrans-EZ siRNA转染试剂在Hela细胞中对内源性基因的转染流程 (Example #2)
SunBio转染试剂在Hela细胞中,辅助siRNA对内源性基因laminA/C的knockdown作用.

一:细胞准备
    Hela细胞使用含有10%小牛血清的DMEM培养基,以3×105/2毫升/孔的密度种在6孔板里,过夜培养, 在转染实验时细胞的融合度达到 80~90%。

二:试剂准备
    SunBio转染试剂(5mg/ml备用液)与 siRNA (0.25mg/ml, 相当于 20mM)在Opti-MEM中分别以 2/1, 4/1 (w/w)的比率准备好,用于转染效率实验。

三:板的规格:6孔板, siEGFP的用量按5.625微克/孔计算配制混合物用于转染实验.

Blank/空白
SunBio 转染试剂/siEGFP (2/1): 5.625mg
SunBio转染试剂/siLamin A/C (2/1): 5.625mg
SunBio 转染试剂/siLamin A/C (4/1): 5.625mg

siLamin A/C即针对Lamin A/C的siRNA; siEGFP即针对EGFP的siRNA, 在本实验中作为非相关siRNA对照.

四:使用SunBio转染试剂准备siRNA-Lamin A/C混合溶液 siRNA-Lamin A/C的用量为5.625mg/孔,与SunBio试剂按不同比例配制混合物用于转染实验.

siEGFP (0.25 µg/µl)
(5.625mg/孔)

Opti-MEM

SunBio 转染试剂 (5 µg/µl) / siEGFP (5.625 µg/孔) 比率 (2/1)

SunBio 转染试剂

Opti-MEM

22.5ml

97.5ml

2.25ml

117.75ml



siLamin A/C (0.25 µg/µl)
(5.625mg/孔)

Opti-MEM

SunBio 转染试剂 (5 µg/µl) / silamin A/C (5.625 µg/孔) 比率 (2/1)

SunBio 转染试剂

Opti-MEM

22.5ml

97.5ml

2.25ml

117.75ml



siLamin A/C (0.25 µg/µl)
(5.625mg/孔)

Opti-MEM

SunBio 转染试剂 (5 µg/µl) / silamin A/C (5.625 µg/孔) 比率 (4/1)

SunBio 转染试剂

Opti-MEM

22.5ml

97.5ml

4.5ml

115.5ml

 

五:每110ml silaminA/C和转染试剂混合后,在RT中反应15min, 每种混合物中各取200ul加入到指定的孔板中。

六:SunBio 转染试剂辅助siLamin A/C 所得的 knockdown 效率, 转染后48小时后通过RT-PCR即可观察。


SunBio Trans-EZ siRNA 转染试剂

产品规格: 5 mg/ml

产品包装: 1 ml/支

试剂保存: 4℃保存,请勿冷冻

图片资料

Hela-EGFP 细胞中,SunBio Trans-EZ siRNA 转染试剂 siegfp 的转染效果 




 

 

PC-3M-Luc-C6 细胞中 SunBio Trans-EZ siRNA 转染试剂对 siLuciferase 的转染效果



 

 

Hela-EGFP 细胞在使用SunBio Trans-EZ siRNA 转染试剂转染 siegfp之后的细胞活力测试 ¾ MTT 分析