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细菌16S扩增检测试剂盒

细菌16S扩增检测试剂盒

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产品名称: 细菌16S扩增检测试剂盒

英文名称: 细菌16S扩增检测试剂盒

产品编号: PR8801

产品价格: 0

产品产地: 中国

品牌商标: BioTeke

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使用范围: null

北京百泰克生物技术有限公司
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产品描述:

本试剂盒是PCR扩增细菌16S rDNA的试剂盒,通过进一步对PCR扩增的DNA片段进行序列分析,可以鉴定被检测细菌种类。16S rRNA的遗传较为稳定,长度在1550±200 bp左右,代表信息量适中,是研究系统进化的好材料。目前已经报道了10,000种以上的细菌16S rDNA序列。通过对16S rDNA的序列分析,可以将细菌划分到属或种。

16S rDNA可以通过PCR法扩增获得,由于16S rDNA的两端较为保守,可以在这保守区域设计引物,扩增鉴定细菌的16S rRNA基因,然后进行DNA测序,再将其DNA序列与GenBank中的已知序列进行同源性比较后,可以判定检测细菌种类。

本试剂盒中包含了进行细菌16S rDNA PCR扩增的所有试剂,同时还提供了三条测序用引物(正向测序引物Seq forward、反向测序引物Seq reverse、中间测序引物Seq internal)。PCR扩增引物可以扩增全序列的DNA片段(Forward primer/ Reverse primer2),得到较为全面的16S rDNA序列信息。

对于难以培养细菌、生化反应不明显及传统表型方法不能鉴定的细菌,使用本试剂盒鉴定未知细菌种类尤为方便。

产品组成:

PCR Premix*

1 ml

×3

PCR primers

Forward primer10 pmol/μl

100 μl

×1

Reverse primer10 pmol/μl

100 μl

×1

Seq primers

Seq forward10 pmol/μl

Seq internal10 pmol/μl

Seq reverse10 pmol/μl

50 μl

×1

50 μl

×1

50 μl

×1

Positive Control DNA1 ng/μl

100 μl

×1

16S-free H2O

1 ml

×3

操作方法

1. 模板DNA的提取。

实验用的细菌基因组DNA可以通过传统的苯酚/氯仿抽提法提取,也可以使用本公司生产的细菌基因组DNA提取试剂盒(离心柱)DP2001获得。

对某些细胞壁比较薄的革兰氏阴性细菌,可以使用灭菌牙签挑取单菌落,加入PCR Premix,摇晃牙签使菌落入PCR管中,丢弃牙签。

2. 按下述组份配制PCR反应液。

模板DNA*

PCR Premix

Forward Primer

Reverse Primer2

16S-free H2O

100200ng

50

2

2

up to 100

2μl

μl

μl

μl

μl

3. PCR反应条件如下。

94 5 min.

94 1 min.

5557 1 min. 35 Cycles

72 1 min.

72 5 min.

4. 琼脂糖凝胶电泳。

使用1% 的琼脂糖凝胶进行电泳,PCR产物长度1.5 kbp左右(Forward Primer/Reverse Primer),阳性对照约为1500 bp

5. PCR产物的回收及DNA测序。

使用切胶回收试剂盒(BioTeke CodeDP1722)回收纯化PCR扩增产物,30-50μl洗脱,然后进行DNA测序, 1.5 kbpPCR扩增片段可以用Seq forwardSeq internalSeq reverse引物进行测序。

6. 菌种鉴定。

DNA测序结果与相应的数据库(NCBIRDPEBI等)进行对比,确定菌种种类。

其他说明

1. 实验时应进行阴性对照实验,可以检测PCR反应体系是否有细菌污染。

2. PCR反应用模板以菌体的基因组DNA为佳,对于某些细胞壁比较薄的革兰氏阴性细菌,也可以直接挑取菌落进行16S rDNA的快速检测。

 

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