细胞周期与凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)

产品简介：

 本产品检测原理基于碘化丙啶（Propidium, PI）染色方法分析细胞周期和凋亡。碘化丙啶是一种双链DNA染料，其嵌入双链DNA中可以产生荧光，并且荧光的强度和双链DNA的量成正比。

 在细胞周期中，G0和G1期细胞有一套染色体，G2和M期细胞有两套染色体，S期介于两者之间。经过碘化丙啶染色后，处在不同细胞周期中的细胞的荧光强度是不一样的。假定G0和G1期的细胞荧光强度为1，那么G2和M期的细胞的荧光强度为2，S期的细胞介于1和2之间。

 细胞凋亡时，由于细胞核皱缩和DN**段化，染色时DN**段会从打孔的细胞膜处丢失，流式细胞仪检测时，荧光强度小于1，即Sub-G1峰或者凋亡细胞峰。

 细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。凋亡前期，染色质皱缩，细胞密度增加，前向角光散色显著降低。凋亡后期，细胞产生凋亡小体，前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

 本试剂盒可用于培养的贴壁细胞或者悬浮细胞检测，也可用于组织细胞检测。

贮藏条件：

-20℃，避光条件下，保存1年以上。0-5℃，避光条件下，可以保存2个月。

使用说明：

1. 自备试剂：

PBS；70%乙醇

2. 细胞样品准备：

   a、 贴壁细胞：吸弃细胞培养液，胰酶消化吹打细胞，制备单细胞悬液，1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再一次1000g离心5分钟沉淀细胞。

   b、 悬浮细胞：1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再一次1000g离心5分钟沉淀细胞。

   c、 组织细胞：将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后，用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时。经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再一次1000g离心5分钟沉淀细胞。

3. 细胞固定：

   细胞沉淀用1ml预冷的70%乙醇轻轻混匀，4℃固定2个小时以上或者过夜。接下来1000g离心5分钟沉淀细胞后，用1ml预冷的PBS重悬。然后再次1000g离心5分钟沉淀细胞。

4. 染色：

碘化丙啶染色液配置：0.5 ml染色缓冲液中加入10 ul碘化丙啶储液和10ul RNase A，混匀待用。每个细胞样品加入0.5ml配置好的碘化丙啶染色液，轻轻混匀重悬细胞。37℃，避光温浴30分钟后，即可上流式细胞仪检测（5小时内完成为佳）。激发波长为488nm，检测红色荧光。

注意事项：

1. 操作碘化丙啶时，应注意防护，保护眼睛、避免吸入、并戴一次性手套。

2. 碘化丙啶存在淬灭现象，保存和使用过程中注意避光。

包装规格