BL21(DE3)pLysS感受态细胞-细胞株/菌种-试剂-生物在线
BL21(DE3)pLysS感受态细胞

BL21(DE3)pLysS感受态细胞

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产品名称: BL21(DE3)pLysS感受态细胞

英文名称: 供应BL21(DE3)pLysS感受态细胞

产品编号: C1500

产品价格: 0

产品产地: 北京

品牌商标: solarbio

更新时间: 2023-08-11T10:26:26

使用范围: null

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BL21(DE3)pLysS感受态细胞

 

产品简介: 

  本公司生产的BL21(DE3)pLysS感受态细胞是采用大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19 质粒检测,转化效率可达 107,-70℃保存6 个月转化效率不发生改变。 

基因型:F-, ompT, hsdSB(rB-mB-), dcm, gal(DE3), pLysS, Cmr 

特点:该菌株带有质粒 pLysS,因此具有氯霉素抗性。质粒 pLysS 含有表达 T7 溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 

操作方法: (以下各步骤均为无菌操作) 

1、将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以 100ul 感受态细胞为例。 

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA,注意目的 DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置 30 分钟。 

3、将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒,然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟,不要摇动离心管。 

4、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的 SOC 或 LB 培养基,37℃ 150rpm振荡培养 1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。 

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或 LB 平板,37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的 DNA总量较多,可取 100ul 左右的转化产物涂板;反之,如转化的 DNA总量较少,可取 200-300ul 的转化产物涂板。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。 

注意事项: 

    1、实验过程中应严格无菌操作,防止其它 DNA或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。 

    2、感受态细胞不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。 

    3、转化时,转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源 DNA 量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。 

    4、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失将到*低。

   

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