重组肠激酶

Cat.No.: REK08

CAS: 9017-74-8
EC: 3.4.21.9

储存温度：-20℃或以下

来源：重组牛肠激酶，大肠杆菌表达

蛋白序列：氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致。

1.产品简介

雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶经HPLC纯化，纯度高，特异性高，不含其他蛋白酶。肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸（D-D-D-D-K）。可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。

2.产品特性

单位定义：1U定义为在25℃，12h~16h之内，将0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。

3.推荐使用方法

1）25℃酶切条件：

   按照酶活性定义，酶切条件举例：

      25mM Tris-HCl 8.0体系中：

   融合蛋白    0.1-1mg/ml（蛋白总量50-100μg）

   重组EK       0.1-0.2U

25℃过夜酶切，或完全酶切需12-16h，用SDS-PAGE检测酶切效果。

2）4℃低温酶切条件：

   4℃能对底物进行有效酶切，但需要将酶切时间延长至48-64h，或增加2-3倍酶量。

3）酶切优化和放大

  优化：可以对酶切条件进行优化，例如缓冲液pH，融合蛋白浓度，EK的量，以及酶切时间，使融合蛋白能在稳定条件下被酶切，用SDS-PAGE检测酶切效果。

  放大：选择优化后的反应条件，按该条件等比例放大，用SDS-PAGE检测酶切效果。

4）去除重组肠激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析（例如sigma T0637）去除重组肠激酶。

5）注意：不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。

4.常见影响肠激酶活性的因素

  在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：

1）为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，再进行酶切。

2）若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切500μg蛋白）。

3）如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。

5.储存和运输稳定性

酶液储存稳定性：-20℃，24个月稳定；25℃，一周内，无活性损失。缓冲体系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250mM NaCl，2mMCa²⁺，50%甘油。

酶液反复冻融稳定性：反复冻融5次，无活性损失。

运输稳定性：蓝冰保温运输，稳定。

6.产品优势
（1）特异性：特定的蛋白酶，切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸 (D-D-D-D-K)。
（2）纯度高：不含其他蛋白酶，无非特异性切割。

（3）无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。

（4）质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。

（5）符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2008质量体系并符合GMP指导原则。

（6）质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。

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