重组肠激酶上海雅心生物技术有限公司

性能参数

产品名称: 重组肠激酶
英文名称: Recombinant enterokinase
产品货号: REK08
产品规格: 100U,100KU,1MU
产品产地: 上海
产品商标: YaxinBio
价    格: 180元
保存与运输: 2-8℃
现货状态: 现货
产品资料: 资料下载
更新时间: 2018/8/17 13:38:00
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诚信指数:5点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海雅心生物技术有限公司
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产品详细描述

 重组肠激酶

Cat.No.: REK08

CAS: 9017-74-8
EC: 3.4.21.9

储存温度:-20或以下

来源:重组牛肠激酶,大肠杆菌表达

蛋白序列氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致

 

1.产品简介

雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶HPLC纯化,纯度高,特异性高,不含其他蛋白酶。肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸D-D-D-D-K可以在较宽pH范围(4.5-9.5)和较宽温度范围有效切割融合蛋白。肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签。

 

2.产品特性

来源

重组大肠杆菌

外观

澄清、无色至淡黄色液体

活性

 5.0 U/μl

纯度(蛋白电泳)

单一主条带

电泳(分子量)

25.8 ±2.58 kDa

单位定义:1U定义为在25℃,12h~16h之内,将0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。

 

3.推荐使用方法

125酶切条件:

   按照酶活性定义,酶切条件举例:

      25mM Tris-HCl 8.0体系中:

   融合蛋白    0.1-1mg/ml(蛋白总量50-100μg

   重组EK       0.1-0.2U

25过夜酶切,或完全酶切12-16hSDS-PAGE检测酶切效果

24低温酶切条件:

   4℃能对底物进行有效酶切,但需要将酶切时间延长至48-64h,或增加2-3倍酶量。

3)酶切优化和放大

  优化:可以对酶切条件进行优化,例如缓冲液pH,融合蛋白浓度,EK的量,以及酶切时间,使融合蛋白能在稳定条件下被酶切,用SDS-PAGE检测酶切效果。

  放大:选择优化后的反应条件,按该条件等比例放大,用SDS-PAGE检测酶切效果。

4)去除重组肠激酶的方法:使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析(例如sigma T0637)去除重组肠激酶。

5)注意:不建议37条件下酶切,可能会有非特异性酶切出现。

 

4.常见影响肠激酶活性的因素

  在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切:

1)为获得理想酶切结果,请将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,再进行酶切。

2)若不便透析,可将样品稀释,咪唑含量在100mM以下,NaCl浓度在50mM以下,甘油浓度小于5%以下进行酶切,酶的用量与蛋白的比例不变(即1U酶切500μg蛋白)。

3)如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种,且不便去除,此时适当增加酶量或延长酶切时间,也可达到较好酶切效果。


5.储存和运输稳定性

酶液储存稳定性:-20℃,24个月稳定;25,一周内,无活性损失。缓冲体系:50mM Tris-HClpH8.0250mM NaCl2mMCa2+50%甘油。

酶液反复冻融稳定性反复冻融5次,无活性损失

运输稳定性蓝冰保温运输稳定。

 

6.产品优势
(1)特异性:特定的蛋白酶,切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸 (D-D-D-D-K)
(2)纯度高:不含其他蛋白酶无非特异性切割

(3)无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料

(4)质量稳定批量生产,可保证稳定连续的批次生产产品批次间无差异,质量稳定

(5)符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2008质量体系并符合GMP指导原则。

(6)质量文件完整:按客户需求可提供相关法规支持文件

 

7.相关产品

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