谷胱甘肽高速纯化树脂上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 谷胱甘肽高速纯化树脂
英文名称: GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF
产品货号: 20508ES10
产品规格: 10ml
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 1238元
保存与运输: 4℃保存,冰袋运输。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/11/19 12:36:00
浏览人数:204
诚信指数:898点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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产品详细描述

 谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化)

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF
产品信息
产品名称          
产品编号
规格
储存
价格(元)
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF
谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化)
20508ES10
10ml
4
1238.00
20508ES50
50ml
4
4568.00
20508ES60
100ml
4
7928.00
产品描述
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一种GST标签蛋白纯化树脂,结构上是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,通过12个原子的间隔臂,用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。
此外,本品特异性好,性价比高,可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。
产品性质
基质(Matrix
高度交联的4%琼脂糖微球
配体(Ligand
通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽
孔径(Bead size
45-165µm
载量(Capacity
10mg GST protein/ml 基质(40kDa
最大压力(PressureMax
0.3 MPa, 3bar
pH稳定范围(pH range
3-12
储存缓冲液(Buffer
20%乙醇
运输和保存方法
冰袋运输。4保存,有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤除菌。
结合/洗杂缓冲液PBSpH7.4(140mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4, pH7.4)
洗脱缓冲液50mM Tris-HCl, 10mM 还原型谷胱甘肽,pH 8.0
【注】:结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1-10mM DTT
使用方法
【注】样品在上样前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。
1 GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的装填(适用于各种中压色谱层析柱的填装)
1)用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
2)将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3)如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。
4)打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这六可避免液压对所形成柱床的冲击,避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用所使用泵的最大流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。
【注】:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%,当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
5)关闭泵,关闭层析柱出口。
6)如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。
7)将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。
8)将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
2 样品纯化
1平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
2上样Resin平衡后,加入蛋白样品,使其与Resin充分接触,提高目的蛋白回收率,收集流出液。
3洗杂:用10-15倍柱体积的洗杂缓冲液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
4洗脱:使用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液,收集洗脱液,即目的蛋白溶液。
5清洗与保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%乙醇中,置于4保存,防止填料被细菌污染。
3 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
4 填料清洗
GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生,但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。
1)去除一些沉淀或变形物质
2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。
2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% TritonX-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。
注意事项
1)请勿冷冻保存本产品。
2GSTSep Glutathione Agarose Resin使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
3)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
附表问题及解决方案

问题
可能原因
推荐解决方案
柱子反压过高
填料被堵塞
清洗树脂。
裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤,或离心去除。
样品太黏稠
样品中含高浓度的核酸,延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI (终浓度为5µg/ml),Mg2+(终浓度1mM),冰上孵育10-15min
缓冲液太黏稠
有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白
GST标签蛋白变性了
使用温和的裂解条件,实验条件以经验为准。
过度的裂解使目的蛋白变性
目的蛋白聚集产生沉淀
在细胞裂解前溶液中加入DTT,终浓度为1-10mM

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