细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒上海翊圣生物科技有限公司

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性能参数

产品名称: 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒
英文名称: Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit
产品货号: 20126ES50
产品规格: 50T
产品产地: Yeasen
产品商标: Yeasen
价    格: 598.00元
保存与运输: 冰袋运输。-20℃保存,1年有效。
产品资料: 实验方法技术资料
更新时间: 2019/11/11 17:23:00
浏览人数:427
诚信指数:898点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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上海翊圣生物科技有限公司
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上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
邮编:
200030
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400-6111-883、021-34615995
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产品详细描述

产品信息

产品名称  

产品编号

规格

储存

价格(元)

Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒

20126ES50

50T

-20

598.00

Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit 细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒

20126ES60

100T

-20

998.00

产品描述

细胞核蛋白、细胞浆蛋白在细胞研究和蛋白质组学中具有重要意义,因此在体外研究中需要将其从细胞或组织中分离。本试剂盒提供了一种较为简单方便,高效的蛋白抽提方法,其原理是:通过细胞浆蛋白抽提试剂AB,在低渗透压条件下,使细胞充分膨胀,然后破坏细胞膜,释放出细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂C抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒1次可对2×106个细胞和30-50mg组织样品进行抽提,按照该使用量,20126ES50可抽提50个样品,20126ES60可抽提100个样品。

产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

20126ES50(50T)

20126ES60(100T)

20126-A

Cytoplasmic Extraction Reagent 胞浆蛋白抽提试剂A

15 ml

30 ml

20126-B

Cytoplasmic Extraction Reagent B胞浆蛋白抽提试剂B

0.5ml

1ml

20126-C

Nuclear Extraction Reagent 胞核蛋白抽提试剂

2.5 ml

5 ml

运输和保存方法

冰袋运输。-20保存,1年有效。

注意事项

1)客户需自备PMSF

2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

将试剂盒各组分溶解后立即放置在冰上,混匀。取适量的胞浆蛋白抽提试剂A(以下统称:试剂A胞核蛋白抽提试剂(以下统称:试剂C备用,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM

细胞样品蛋白的抽提

1)细胞处理

对于贴壁细胞PBS清洗细胞1EDTA溶液消化细胞或用细胞刮子刮下细胞,并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽量吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

【注】:尽量避免用胰酶消化细胞,以免胰酶降解抽提的目的蛋白。

对于悬浮细胞:离心收集细胞,PBS清洗细胞1次,收集细胞,尽量吸尽上清,留细胞沉淀备用。

2 20μl细胞沉淀加入200μlPMSF的试剂A

【注】:对于2×106Hela细胞,其细胞沉淀的体积大约为20μl40mg

3 最高速剧烈涡旋5s,完全悬浮分散细胞沉淀。

【注】:如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开,可以适当延长旋涡震荡的时间。

4 冰浴10-15min

5 加入胞浆蛋白抽提试剂B(以下统称:试剂B 10μl。最高速剧烈涡旋5s,冰浴1min

6 最高速剧涡旋5s412,000-16,000g离心5min

7 立即吸取上清至一预冷的塑料管中,上清即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用,也可以冻存备用。

【注】:此步千万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免吸到沉淀。

8 对于沉淀,完全吸尽残余上清,加入50μlPMSF的试剂C

【注】:此步需完全吸尽上清,否则会带来细胞浆蛋白的污染。

9 最高速剧烈涡旋15-30s,把沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中,每隔1-2min再高速剧烈涡旋15-30s,共30min104 12,000-16,000g离心10min

11)立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用,也可以-70冻存备用。

组织样品的抽提

1 将组织切成非常细小的碎片。根据后续使用量按照20:1的比例混合试剂AB,并加入PMSF至最终浓度为1mM,混匀即可配制成组织匀浆液。按照每60mg组织加入200μl组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液,并在玻璃匀浆器内充分匀浆。

【注】:匀浆需在冰浴或4进行。

2 匀浆后将匀浆液转移至塑料离心管内,冰浴放置15min

3 4 1,500g离心5min。把上清转移至一预冷的塑料管中,上清含部分细胞浆蛋白。

【注】:吸上清时千万不要触及沉淀。

4 对于上述收集得到的沉淀,已经充分匀浆,但很多细胞仍没有破碎。接下来请参照【细胞样品蛋白抽提】的步骤2)开始操作,即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作,即可得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤【组织样品抽提】中步骤3)抽提得到的细胞浆蛋白合并备用。

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产品编号

产品名称

规格

价格(元)

20104ES03

PMSF ***甲基磺酰氟

1g

98.00

20104ES08

PMSF ***甲基磺酰氟

5×1g

318.00

20127ES50

Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit 细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒

50T

508.00

20127ES60

Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit 细胞膜/细胞浆蛋白抽提试剂盒

100T

918.00

 

 

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