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L-组氨酸盐酸盐

L-组氨酸盐酸盐

商家询价

产品名称: L-组氨酸盐酸盐

英文名称: L-Histidine, hydrochloride

产品编号: 60723ES25

产品价格: 1095.00

产品产地: 翌圣生物

品牌商标: Yeasen

更新时间: 2024-02-04T09:39:47

使用范围: null

规格 价格
100 T 1095.0
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
  • 联系人 : 李自转
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  • 所在区域 : 上海
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  • 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com

产品简介

 

总胆固醇(Total Cholesterol,TC)是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和,包括游离胆固醇(Free Cholesterol,FC)和胆固醇酯(Cholesteryl Ester,CE)。本试剂盒的检测方法是微量法,既可以用可见分光光度计检测,也可以用酶标仪检测。该产品的最低检出限是0.143 μmol/mL,线性范围为0.156-5 μmol/mL。

作用原理是通过酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇(FC)和游离脂肪酸(FFA),从而把胆固醇酯转化为FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化,生成4-胆甾烯酮和H2O2;最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成红色醌类化合物,其在500 nm有特征吸收峰,颜色深浅与TC含量成正比。作用方式如下:

测定总胆固醇(TC)请选择60723ES 总胆固醇(TC)含量检测试剂盒;测定游离胆固醇(FC)请选择60724ES 游离胆固醇(FC)含量检测试剂盒。

 

产品信息

 

货号

60723ES60

规格

100 T

 

组分信息

 

组分编号

组分名称

规格

储存条件

60723-A

试剂一

30 mL

2~8℃

60723-B

试剂二

160 μL

2~8℃

60723-C

试剂三

25 μL

2~8℃

60723-D

标准品

10 mg

2~8℃

 

储存条件

 

2~8℃保存,有效期6个月。

 

使用说明

 

【注意事项】实验之前建议选择3个预期差异大的样本做预实验,如果样本吸光值不在测量范围内,建议稀释或者增加样本量进行检测。

  1. 需自备的仪器和溶剂:

可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、可调式移液枪、EP管、蒸馏水和异丙醇。

  1. 溶液的配制:

1)自备提取液异丙醇:大约需要110 mL,常温保存;试剂盒内提供一个30 mL棕色空瓶,仅做分装使用。

2)标准品溶液的配置:10 mg胆固醇使用前加入517 μL提取液,振荡溶解后即为50 μmol/mL的胆固醇标准溶液,2~8℃可保存4周。

3)试剂三液体置于试剂瓶内EP管中。

4)工作液的配制:根据样本量将试剂一、试剂二、试剂三按照3 mL、20 μL、3 μL的比例配制工作液,约为16 T,现用现配。

3. 操作步骤

1)样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

a. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约0.1 g组织,加入1 mL提取液)进行冰浴匀浆。10000 g,4℃离心10 min,取上清置冰上待测。

b. 细菌/细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1 mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300 w,超声2秒,间隔3秒,总时间3 min);然后10000 g,4℃离心10 min, 取上清置于冰上待测。

c. 血清(浆)等液体样本:直接测定,若有沉淀请离心后取上清待测。

2)测定步骤

a. 可见分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长至500 nm,分光光度计蒸馏水调零。

b. 标准溶液的稀释:将50 μmol/mL胆固醇标准溶液用提取液进行稀释,得到2.5、2、1.25、0.625、0.3125、0.15625 μmol/mL的标准溶液备用。

c. 标准溶液稀释可参考下表:

序号

稀释前浓度(μmol/mL)

标准溶液体积(µL)

提取液体积(µL)

稀释后浓度(μmol/mL)

1

50

50

950

2.5

2

2.5

800

200

2.0

3

2

625

375

1.25

4

1.25

500

500

0.625

5

0.625

500

500

0.3125

6

0.3125

500

500

0.15625

注:实验中每个标准管需20 µL标准溶液。

d. 在1.5 mLEP管/96孔板按下表步骤加样

试剂名称(µL)

测定管

标准管

空白管

样本

20

-

-

标准溶液

-

20

-

提取液

-

-

20

工作液

180

180

180

充分混匀,37℃静置15 min,反应完成后测定500 nm处吸光值A,分别记为A测定、A标准和A空白,ΔA测定=A测定-A空白,ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准曲线只需测1-2次。注:若样本为血清,则空白管中的提取液(异丙醇)需要更换为蒸馏水进行实验。

3) 总胆固醇含量计算

a. 标准曲线的绘制:

根据标准管的浓度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,μmol/mL)。

b. 总胆固醇含量的计算:

(1)按血清(浆)等液体体积计算:TC含量(μmol/dL)=x×100

(2)按样本蛋白浓度计算:TC含量(μmol/mg prot)=x×V提取÷(Cpr×V提取)=x÷Cpr

(3)按样本质量计算:TC含量(μmol/g 质量)=x×V提取÷W=x÷W

(4)按细胞/细菌数量计算:TC含量(μmol/10cell)=x×V提取÷500=0.002x

100:单位换算系数,1 dL=100 mL;V提取:加入样本的提取液体积,1 mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

4. 实验实例:

取鼠血清样本,直接按照测定步骤操作,使用96孔板测得计算ΔA测定=A测定-A空白=0.092-0.048=0.044,根据标准曲线y=0.4331x-0.0623,计算 x=0.2454,按血清(浆)等液体体积计算:TC 含量(μmol/dL)=x×100=0.2454×100=24.54 μmol/dL。

注意事项

  1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者用提取液稀释样本后再进行测定,但注意同步修改计算公式。
  2. 提取液中含有使蛋白变形的成分,故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  4. 本产品仅作科研用途!

Ver.CN20240122