超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）试剂盒说明书
测定意义：
SOD 催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H2O2 和O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清
除酶，也是H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理：
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.)，O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色
甲臜，后者在560nm 处有吸收；SOD 可清除O2-.，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越
深，说明SOD 活性愈低，反之活性越高。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、酶标板、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×5 支，4℃保存，用时每支加1.8mL 双蒸水，现配现用；
试剂三：液体110uL×1 支，4℃保存；
试剂四：液体4mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备 ：
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200 万细菌或细胞加入400μL 提取
液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞；8000g 离心10 分钟，取上清，置冰上待测。
称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10 分钟，取上清，置
冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤和操作表：
测定管 空白管1 对照管 空白管2
试剂一（uL） 80 80 80 80
试剂二（uL） 170 170 170 170
试剂三（uL） 2 2
样品（uL） 30 30
试剂四（uL） 60 60 60 60
双蒸水（uL） 2 30 32
充分混匀，室温静置30min 后，加入96 孔板，560nm 处测定各管吸光值。
注意事项：
1、测定前将试剂一、二和四室温放置，使试剂的温度不低于室温后再测定。
2、试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。
SOD 活性计算：
1、抑制百分率的计算
抑制百分率＝[(A对照管－A空白管2)－(A测定管－A空白管1)]×(A对照管－A空白管2) ×
100%
尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于
70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释
样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。
2、SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系
中的SOD 酶活力定义为一个酶活力单位。
3、SOD 酶活性计算：检测体系中SOD 酶活力单位＝抑制百分率 / (1－抑制百分率)
例如，当抑制百分率为50%时，待测样品中SOD 酶活力单位＝50% / (1－50%)＝1 U/mL；
当抑制百分率为60%时，待测样品中SOD 酶活力单位＝60% / (1－60%)＝1.5 U/mL。
（1）按样本蛋白浓度计算
SOD 活性（U/mg prot）=抑制百分率 ÷ (1－抑制百分率)÷样本蛋白浓度（mg/mL）。
（2）按样本鲜重计算
SOD 活性（U/g mass）=抑制百分率 ÷ (1－抑制百分率)÷样本鲜重（g/mL）。
（3）按细菌或细胞个数计算
SOD 活力（U/104 cell）=抑制百分率 ÷ (1－抑制百分率)÷细菌或细胞密度（104/mL）