预染超低分子量蛋白质Marker（3.3kD-31.0kD)说明书
货号： PR1900
规格： 20T (200 μ1)
保存： -20℃保存，有效期为一年。避免反复冻融，建议分装冻存。
产品简介:
本产品包含预染的3种多肽和2种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3. 3kD-31. 0kD。可以用于直接观察
蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。经Tricine-甘油SDS-PAGE凝胶电泳时以及转移到
PVDF或NC膜上可看到清晰的5条蓝色的蛋白条带。本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，每种预染蛋白含量
约为40μg，配有一支1×上样缓冲液。
使⽤说明:
1. 开封后，溶于200 μ1 1×上样缓冲液，可根据需要进行小量分装，每管10 μl，-20℃贮存，每次取一管使用，
避免反复冻融。
2. 使用前取分装后的小管室温融化后即可上样电泳。
电泳示意图：

凝胶的配置⽅法:
分离胶 夹层胶 浓缩胶
20%/4.5ml 16.5%/4.5ml 15.5%/4.5ml 10%/2ml 4%/2ml
49.5%T 3%C / / / 0.407ml 0.160ml
49.5%T 6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml / /
凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml 0.667ml 0.496ml
甘油 0.48ml 0.48ml 0.48ml / /
ddH2O 0.70ml 1.02ml 1.125ml 0.926ml 1.344ml
10%APS 401l 401l 401l 20μ| 20μ|
TEMED 51l 51l 51l 31l 31l
凝胶制备及染⾊注意事项:
1. 先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，最后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。电泳时，30v跑1-2
小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8小时。
2. 电泳之后可将胶置于固定液中固定20 分钟，再进行染色，能得到较好的蛋白条带；如时间不允许，也可

不进行固定直接染色。如果使用配方7 进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白
胶快速染色液(货号:P1300)，该产品具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。
3. 由于多肽所含的氨基酸数目较少，因此如该多肽含有过多的极性氨基酸(碱性或酸性)，则会影响其在
SDS-PAGE 图上的条带迁移率，即其表观分子量可能和多肽的氨基酸理论推算分子量有一定距离。
4. 由于SDS-PAGE 的图谱上，蛋白质对数分子量和迁移率成正比直线关系的分子量范围为15,000-200,000，
因此对于分子量小于10000 的蛋白质或多肽的分子量，只能根据标准分子量进行估计，推断其是否落入预测
的分子量范围。
5. 由于超低分子量多肽（3000及3000以下），极易从凝胶上浸出，因此染色及脱色时间不宜太长，脱色后凝
胶也不宜在水中浸泡保存过久，否则条带会消失。
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P1300-500 考马斯亮蓝快速染色
附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
1. 49.5% T 3 % C (配制夹层股和浓缩胶)
丙烯酰胺 48g
甲叉双丙烯酰胺 1.5g
用ddH20溶解后定容至100ml
2. 49. 5 % T 6 % C (配制分离胶)
丙烯酰胺 46. 5g
甲叉双丙烯酰胺 3. 0g
用ddH20溶解后定容至100ml
3. 凝胶缓冲液
Tris碱 182g
ddH20 300ml
用HCl调节pH值至8.45
用ddH20定容至 500ml
再加入SDS 1.5g
4 . 10×阳极缓冲液(下槽缓冲液〕
Tris碱 121. 1 g
ddH20 400ml
用HCl调pH值至8.9
用ddH20定容至 500ml
5. 阴极缓冲液(上槽缓冲液)
Tris碱 12 .11g
Tricine 17.92g
SDS 1g
用ddH20定容至1000ml
此溶液不用调节pH值
6. 固定液
0.5% 戊二醛
30% 乙醇
用ddH20定容至100ml
7. 染色液
50% 甲醇
10% 乙酸
0.2% 考马斯亮蓝G-250
用ddH20定容至500ml