TOP10感受态细胞北京索莱宝科技有限公司--实验室产品

性能参数

产品名称: TOP10感受态细胞
英文名称: E.coli TOP10 Competent Cells
产品货号: C1200-20
产品规格: 20×100ul
产品产地: 北京/solarbio
产品商标: Solarbio
价    格: 240元
保存与运输: -70℃保存
现货状态: 大量现货
产品资料: 资料下载
更新时间: 2019/7/10 14:47:00
浏览人数:250
诚信指数:579点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
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北京市通州区马驹桥联东U谷景盛南四街85A三层
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马金成
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北京·北京
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产品详细描述

 

本公司生产的TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108,-70℃保存六个月转化效率不发生改变。

基因型:F_ mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoR araD139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

 :一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。其中φ80 lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补,可用于蓝白斑筛选。该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

操作方法:(以下各步骤均为无菌操作)

1将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以100ul感受态细胞为例。

2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA,注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置30分钟。

3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒,然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟,注意不要摇动离心管。

4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基,37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的DNA总量较多,可取100ul左右的转化产物涂板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事项:

1、感受态细胞应保存在-70℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。

2、实验过程中应严格无菌操作,防止其它DNA或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3、转化时,转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4、转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到最低。

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