BL21(DE3)pLysS感受态细胞北京索莱宝科技有限公司--实验室产品

性能参数

产品名称: BL21(DE3)pLysS感受态细胞
英文名称: BL21(DE3)pLysS Competent Cells
产品货号: C1500-20
产品规格: 20×100ul
产品产地: 北京/solarbio
产品商标: Solarbio
价    格: 300元
保存与运输: -70℃保存,必须加干冰运输
现货状态: 现货
产品资料: 资料下载
更新时间: 2019/7/11 11:44:00
浏览人数:309
诚信指数:579点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
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北京市通州区马驹桥联东U谷景盛南四街85A三层
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联系人:
马金成
所在区域:
北京·北京
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公司展台:

产品详细描述

BL21(DE3) pLysS感受态细胞说明书
货号:C1500
规格:10×100ul / 20×100ul
保存:-70℃保存,干冰运输。自收货之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6个月。
产品简介: 本公司生产的BL21(DE3)pLysS感受态细胞是采用大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达107,-70℃保存6个月转化效率不发生改变。
基因型:F-, ompT, hsdSB(rB-mB-), dcm, gal(DE3), pLysS, Cmr 特 点:该菌株带有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。质粒pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
操作方法:(以下各步骤均为无菌操作)
1、将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以100ul感受态细胞为例。 2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA,注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置30分钟。 3、将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒,然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟,不要摇动离心管。 4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基,37℃ 150rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。 5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的DNA总量较多,可取100ul左右的转化产物涂板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300ul的转化产物涂板。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。
注意事项: 1、实验过程中应严格无菌操作,防止其它DNA或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。 2、感受态细胞不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。 3、转化时,转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。 4、为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失将到最低。
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