北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
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快速连接试剂盒说明书
货号：QL0010
规格：20T
保存：-20℃保存。
产品内容：
T4 DNALigase 20ul(4U/ul)
2×Quick Ligation Buffer 200ul
产品简介： 本试剂盒所带T4 DNA Ligase能催化dsDNA、dsRNA或DNA/RNA的5’-磷酸末端和3’-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口，在Solarbio公司特制的2×Quick Ligation Buffer中，室温（25℃）下反应5分钟即可完成连接反应，反应液可直接用于转化，使用方便、快捷，极大地缩短了试验时间。本试剂盒可应用于DN**段克隆入载体、文库构建、TA克隆、Linker连接以及线性DNA的再环化等试验。
单位定义： 在2ul连接反应体系、0.12uM（300ug/ml）的5’-末端浓度条件下，16℃反应30分钟，能使50﹪Hind III消化的λDN**段连接上所需的酶量定义为一个活性单位。
使用方法： 1、按下面配制反应体系 2×Quick Ligation Buffer 10ul 载体 50ng 插入片段 50-150ng T4 DNA Ligase 1ul dd H2O up to 20ul 2、室温下反应5分钟，反应产物冰上冷却，然后直接用于转化或冻存于-20℃。注意不要热失活，热失活 会急剧降低转化效率。当插入片段超过1.5kb时，延长反应时间至15-30分钟。 注意事项： 1 、2×Quick Ligation Buffer用前应彻底混匀，避免反复冻融，可适当分装成小份以保证质量。 2、为保证有效连接，总的载体DNA与插入片段的总浓度应在1-10ug之间。对单插入来说，插入片段:载体比例在1:2-1:6之间最好，低于2:1会降低连接效率，高于6:1会产生重复插入。 3、如果是做电转化，请将连接产物纯化后再进行电转化。
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