血液基因组DNA提取试剂盒

产品组分

注： 裂解液MS中含有变性剂，请不要直接接触皮肤。

         漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

如消化缓冲也DS有沉淀，在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

产品说明

本产品可用于全血样本的基因组DNA的纯化。纯化原理是首先利用红细胞裂解液先去除血液中的红细胞*，细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱

可逆吸附体系内的基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。

本产品适用于未凝固全血，以及经各种抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸）处理过的全血样本。一次可从0.4 ml全血中提取到3-10 μg高纯度基因组DNA

（OD₂₆₀/OD₂₈₀ =1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验。

*本产品不能从全血中直接提取DNA，要去除血液中红细胞后才能得到高浓度的基因组DNA。如要直接从全血迅速提取高纯度基因组DNA，建议选择Quick血液基因组DNA提取试

剂盒（东盛）。

产品特点

• 高效：一次可获得3-10 μg基因组DNA。
• 高纯度：无须再纯化即可直接用于下游实验。
• 安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。

产品用途

• 常规限制性酶切
• PCR扩增
• 文库构建
• Southern 杂交
• 分子标记分析

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

血液基因组DNA提取流程图

图1  血液基因组DNA纯化流程图

操作方法

1  取血液样本，每400 μl血液加入到一只1.5ml离心管中。加入2倍体积的红细胞裂解液RS。漩涡振荡或上下来回颠倒混匀。5,000 rpm离心3min，弃上清，收集

白色或淡红色沉淀。

 注：如沉淀仍然呈深红色，表明红细胞裂解不充分，可再加500 μl红细胞裂解液RS处理一次。

         对于哺乳动物全血，每400 μ全血中可提取3-10 μg的基因组DNA。如从鸟类、两栖类或更低级的动物血液中提取基因组DNA，因其血液中红细胞有细胞核，血液用量勿超过

        20 μl/离心管。每20 μl全血中可提取40 μg的基因组DNA。

2  加入200 μl消化缓冲液DS，旋涡振荡直至完全分散。

    注：如需去除RNA，加入消化缓冲液DS后，再加入4μl RNase A（100 mg/ml）溶液，震荡混匀，室温放置5min。

3  加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液MS，漩涡振荡混匀。65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

注：加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不

纯。

4  加入220 μl无水乙醇，上下来回颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀，将溶液及絮状沉全部淀转移到纯化柱中。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

    注：此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

5  加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

   注：此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱，以获得高质量基因组DNA。

6  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

   注：漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

7  加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

8  12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   注：此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。

9     将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100 μl洗脱液TE。室温放置2min。

10  12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

   注：洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。

           对洗脱液TE 进行60℃预热，会提高基因组DNA的产量。

图2  基因组DNA电泳图

注意事项

1  柠檬酸、EDTA和肝素三种抗凝剂均可使用。但肝素对酶促反应有可能起抑制作用。采血时如没有特殊要求，请使用柠檬酸或EDTA处理血样。

2  基因组DNA的得率，会因抗凝剂的种类以及血液保存条件的不同而各异。

3  基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。用无菌的离心管分装后保存于-20℃或-80℃。

基因组DNA的浓度及纯度检测

1  基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯

度。

2  DNA 应在OD₂₆₀ 处有显著吸收峰， OD₂₆₀ 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链

DNA、40 μg/ml 单链DNA。

3  OD₂₆₀/OD₂₈₀ 比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用纯化液TE，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。