北京索莱宝科技有限公司  张净花  010-56371206   13426459985

操作说明： 本产品为传统的琼脂糖介质，非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子 量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。

1. 装柱 凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于 60cm。装柱效果可用 染料或丙酮-水溶液进行检验。 以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧， 接好管路。

(1) 让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓 度的缓冲液。

(2) 选择一根一定直径的柱子，长约 30~60cm，根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积 的 1.15 倍），清洗掉 20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1 的比例）配成匀浆。 不要剧烈搅动，以免搅坏微球。

(3) 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无 气泡。

(4) 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使 凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

(5) 打开蠕动泵，让缓冲液缓慢流过，使柱床稳定。

(6) *好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。

2. 平衡

让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和 pH 不变。

3. 上样

(1) 样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先 做处理，再上样。

(2) 介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

(3) 上样体积约为柱体积的 1~2%，越小分离越好。

4. 洗脱

用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。 5. 再生 一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。 6. 注意 在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。

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